慈济化癌保生Ⅱ号方对荷瘤小鼠化疗后胃肠道毒副反应的治疗作用及机制研究

发布时间：2020-11-11 06:46

　　 背景:慈济化癌保生Ⅱ号方(Ciji-Hua'ai-Baosheng Ⅱ Formula,简称CHB-Ⅱ-F),是针对肿瘤患者经化学药物治疗后导致的多种毒副反应而创立的中药方剂。临床治疗表明CHB-Ⅱ-F能够显著缓解化疗所导致的胃肠道毒副反应,减轻患者呕吐情况,刺激患者食欲,增加患者饮食量和体重,使肿瘤患者化疗期间及化疗后的生活状态得到显著改善;但CHB-Ⅱ-F能够改善化疗所致胃肠道不良反应的作用机制尚不够明确。目的:探究在荷瘤小鼠化疗模型中CHB-Ⅱ-F对肿瘤化疗所致胃肠道毒副反应的治疗作用及其机制。研究方法:采购SPF级健康昆明小鼠共72只,于小鼠右前腋窝部位将H22肝癌细胞进行皮下接种,待饲养一周后长出肉眼可见的瘤块,按200 mg/kg一次性大剂量腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-FU)建立肿瘤化疗模型。将化疗成功后的小鼠以随机数字法分为6组:西药对照组(5-FU)、阴性对照组(Negative Control)、中成药对照组(YZXJC)、CHB-Ⅱ-F高剂量组(65g/kg)、CHB-Ⅱ-F中剂量组(32.5g/kg)以及CHB-Ⅱ-F低剂量组(16.25g/kg)。于造模结束后第二天开始给小鼠用药治疗,连续用药14天,每日需定时称量并记录小鼠体重及摄食量;在第7天与第14天分别测量并记录小鼠瘤块的长径(1d)和短径(sd);于最后一次用药结束后,禁食不禁水12小时;在第15天,给予小鼠适量麻醉药物,待麻醉成功后,摘除小鼠眼球取血;将小鼠瘤块完整剥离下来,记录肿瘤重量,根据公式计算药物抑瘤率;将肿瘤组织脱水、包埋和切片,经HE染色后,用光镜观察并拍摄下肿瘤组织病理结构变化;取十二指肠及胃组织脱水、包埋和切片,并进行HE染色后,用光镜观察组织病理变化;运用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测小鼠血清中的瘦素(Leptin)、神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)、表皮细胞生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、胃动素(Motilin,MTL)、食欲素A((Orexin A,OXA)、胃泌素(Gastrin,GAS)、胃饥饿素(Ghrelin)、前列腺素E2(PGE2)以及空肠组织中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量;用蛋白质印迹法(Western blotting,WB)检测下丘脑组织中的阿片-促黑素细胞皮质素原(Proopiomelanocortin,POMC)、食欲素受体1(Orexin Receptor 1,OX1R)、神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)、可卡因-安他非明转录调节肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)、饥饿素受体(GHSR)、刺鼠基因相关蛋白(Agouti gene-related protein,AgRP)以及瘦素受体(Leptin Recepror,Ob-R)等蛋白的表达水平。运用实时荧光定量-聚合酶链式反应(Realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)的方法检测下丘脑组织中NPY、AgRP、POMC、CART、OX1R、Ob-R及GHSR等基因的表达情况;运用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)检测十二指肠组织中的P物质(SP)及5-羟色胺(5-HT)蛋白的表达水平。结果:1.化疗后荷瘤小鼠出现食量减少,经CHB-Ⅱ-F治疗后小鼠摄食量、体重、胃肠粘膜病理变化方面均较5-FU组及阴性对照组有明显改善。2.CHB-Ⅱ与5-FU联合使用可以增强5-FU对肿瘤的抑制作用;相较于阴性对照组小鼠的肿瘤状况,其他各组小鼠的肿瘤体积均有一定的减小,肿瘤细胞的密度也均有所下降,其中以5-FU组及CHB-Ⅱ-F高剂量组抑制肿瘤的作用最为明显;5-FU组、YZXJC组及CHB-Ⅱ-F高、中、低三个剂量组抑瘤率分别为58.88%、28.08%、54.96%、3 7.69%、28.61%。3.ELISA法检测结果显示,相较于5-FU组及阴性对照组,CHB-Ⅱ-F高、中、低三个剂量组小鼠血清中的NPY、OrexinA、Ghrelin、GAS、MTL、EGF及PGE2等含量均有不同程度的升高,血清中Leptin的含量也有均有不同程度降低;CHB-Ⅱ-F高、中、低三个剂量组相较于阴性对照组与5-FU组,空肠组织中的SOD活性明显增加,而其MDA的含量则明显下降。4.蛋白印迹检测及RTFQ-PCR检测结果显示,CHB-Ⅱ-F高、中、低三个剂量组下丘脑组织中OX1R、GHSR、NPY、AgRP等蛋白表达及基因表达明显增加,而三组小鼠Ob-R、POMC、CART等蛋白表达及基因表达则明显降低,基因表达显示与蛋白表达基本一致,且与阴性对照组及5-FU组相比较差异明显;而免疫组织化学技术检测显示,CHB-Ⅱ-F高、中、低剂量组小鼠十二指肠中5-HT及SP蛋白表达均有显著降低。结论:CHB-Ⅱ-F除了能够明显增强5-FU对肝癌移植瘤小鼠肿瘤的抑制作用,还能显著改善化疗所导致的胃肠黏膜的病理损伤状况,减轻氧自由基对胃肠道的攻击,调节胃肠道激素分泌,并通过影响下丘脑中枢神经系统摄食区域的食欲调节因子及外周食欲调节因子来缓解化疗后的胃肠道毒副反应,从而缓解肿瘤化疗所导致的胃肠道毒副反应。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图１?ＣＨＢ－ＩＩ－Ｆ对肿瘤化疗后小鼠体重及摄食量的影响??

图２?ＣＨＢ－ＩＩ－Ｆ对荷瘤小鼠化疗后肿瘤体积、重量及抑瘤率的影响（Ｙ±ｓ，?ｎ＝６－８）??

图３肿瘤组?
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本文编号：2878885