LncRNA-AV310809通过调控Wnt2/β catenin信号通路促进TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞上皮间质转分

发布时间：2022-07-03 12:00

　　目的:通过前期lncRNA基因芯片筛选,我们寻找到了与腹膜纤维化相关的关键性长链非编码RNA（lncRNA-AV310809）,共表达网络分析预测其可能通过纤维化信号通路（Wnt2/β-catenin信号通路）发挥作用。本研究旨在进一步通过体外实验探讨该关键性lncRNA在腹膜纤维化过程中的作用及具体调控机制。方法:1、体外培养腹膜间皮细胞系（HMrSV5）,运用浓度为7ng/ml的转化生长因子（TGF-β1）刺激细胞48h,建立腹膜间皮细胞间质转分化（EMT）模型。运用Western blot检测纤维连接蛋白（FN）、I型胶原蛋白（COL-I）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达变化;运用实时定量PCR验证lncRNA-AV310809表达水平的改变;通过Western blot观察TGF-β1对Wnt2/β-catenin信号通路的影响。2、运用TGF-β1刺激已转染lncRNA-AV310809过表达质粒或阴性对照质粒的HMrSV5细胞。用光镜观察HMrSV5细胞形态的变化;Western blot及免疫荧光检测FN、COL-I、E-cadhe... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
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中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞来源
        2.1.2 试剂及耗材
        2.1.3 主要试剂的配制
        2.1.4 主要仪器及耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与传代
        2.2.2 细胞冻存与复苏
        2.2.3 细胞计数
        2.2.4 质粒转染
        2.2.5 RT- PCR检测各组RNA的表达
        2.2.6 western blot检测各组蛋白表达水平
        2.2.7 细胞免疫荧光
        2.2.8 MTT法检测细胞增殖
        2.2.9 细胞划痕实验
        2.2.10 统计学分析
第3章 结果
    3.1 TGF-β1 诱导HMrSV5细胞EMT发生
    3.2 TGF-β1 刺激HMrSV5细胞后，lncRNA-AV310809表达上调
    3.3 TGF-β1 刺激HMrSV5细胞后，Wnt2/β-catenin信号通路被活化
    3.4 质粒转染效果鉴定
    3.5 过表达lncRNA-AV310809促进TGF-β1 诱导的HMrSV5细胞EMT发生
        3.5.1 过表达lncRNA-AV310809对HMrSV5细胞形态的影响
        3.5.2 过表达lncRNA-AV310809对HMrSV5细胞EMT相关蛋白表达水平的影响
    3.6 过表达lncRNA-AV310809促进TGF-β1 诱导的Wnt2/β-catenin信号通路的活化
    3.7 过表达lncRNA-AV310809对HMrSV5细胞增殖和迁移修复能力的影响
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3654797