重要检疫性蛾类及乳白蚁DNA条形码检测技术研究与应用

发布时间：2022-12-08 01:37

　　外来有害生物种类的准确鉴定是口岸植物检疫工作中的重要环节。口岸检疫工作中昆虫鉴定目前主要依赖于形态学分类方法,但传统的形态鉴定有些不足,如鉴定结果受主观影响较大、昆虫的卵或幼虫等早期形态与残缺虫体难以鉴定等,严重影响了检疫工作的准确性和疫情检出率,增加了检疫性有害生物的传入风险。蛾类,隶属于鳞翅目,大部分种类在幼虫期可以危害林木、粮、棉、蔬菜、油料、药材等各种农林植物和储藏物,常造成巨大的经济损失,对我国农林生产构成了极大的威胁。近年来,随着国际贸易的不断发展,进口货物上特别是水果、干果、苗木等携带的蛾类种类急剧增长,全国各检验检疫口岸截获了大量的蛾类幼虫、蛹和成虫。对我国农业生产和森林生态环境的威胁正在不断加剧。乳白蚁Coptotermes spp.作为检疫性有害生物的一个重要类群,近十多年来在进口原木中的截获率呈现快速增加的趋势,我国口岸植物检疫部门历年从进口木材中截获乳白蚁种类记录占白蚁总数的1/3以上。然而,乳白蚁的分类鉴定的难题为世界分类专家所公认,由于形态趋同、生殖器退化,可做鉴定的形态特征很少,该属在分类上比较混乱,种类鉴定难度大,同物异名和同名异物现象比较普遍。DNA条... 

【文章页数】：91 页

【学位级别】：博士

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致谢
摘要
abstract
第一章 绪论
    1 近年来我国口岸截获的蛾类和乳白蚁的种类
        1.1 我国口岸截获的蛾类种类
        1.2 我国口岸截获乳白蚁种类
    2 有害生物检测技术研究现状及其趋势
        2.1 有害生物检测技术现状
        2.2 分子生物学技术在昆虫检疫中的应用
        2.3 有害生物检测技术发展趋势
    3 昆虫DNA条形码检测技术研究
        3.1 DNA条形码概念和原理
        3.2 DNA条形码的选择标准
        3.3 DNA条形码评价方法
        3.4 DNA条形码技术研究进展
        3.5 DNA条形码技术在植物检疫中的应用
    4 本研究的目的和意义
    5 主要研究内容及预期目标
    6 技术路线
第二章 基于COⅠ基因的美国白蛾分子检测技术研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 供试虫源
        2.2 实验方法
    3 结果与分析
        3.1 美国白蛾与近似种COⅠ基因的获得
        3.2 美国白蛾COⅠ基因实时荧光PCR体系的建立
        3.3 美国白蛾COⅠ基因荧光PCR灵敏度检测
    4 小结和讨论
第三章 口岸截获检疫性蛾类DNA条形码技术研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 结果与分析
        3.1 DNA条形码基因扩增结果
        3.2 DNA条形码分析结果
    4 讨论
第四章 舞毒蛾不同地理种群COⅠ基因的遗传差异和荧光定量检测
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 供试昆虫
        2.2 总DNA提取
        2.3 PCR扩增和序列测定
        2.4 PCR荧光定量检测
        2.5 COⅠ基因序列分析方法
    3 结果与分析
        3.1 舞毒蛾COⅠ基因的PCR扩增和序列特征
        3.2 舞毒蛾不同地理种群COⅠ基因的差异
        3.3 不同地理种群遗传分化
        3.4 TaqMan-MGB探针基因分型检测
    4.讨论
        4.1 舞毒蛾不同地理种群的遗传分化
        4.2 TaqManMGB探针应用于舞毒蛾不同地理种群的检测
第五章 DNA条形码技术在果园蛾类害虫鉴定中的应用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 供试昆虫
        2.2 DNA提取
        2.3 PCR扩增和测序
        2.4 DNA序列数据的处理
    3 结果与分析
        3.1 DNA条形码分析结果
        3.2 进化树构建分析
    4 讨论
第六章 乳白蚁属Coptotermes遗传变异研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 供试虫样
        2.2 DNA的提取
        2.3 PCR扩增及检测
        2.4 DNA序列数据的处理及分子系统树构建
    3 结果和分析
        3.1 COⅠ基因片段的扩增和分析
        3.2 COⅡ基因片段的扩增和分析
        3.3 16S rRNA基因片段的扩增和分析
        3.4 ITS基因片段的扩增和分析
        3.5 遗传距离分析
        3.6 分子系统树构建与分析
    4 讨论
第七章 基于COⅡ和ITS基因序列特征的乳白蚁分子鉴定技术研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 供试虫样
        2.2 DNA模板的制备
        2.3 特异性引物及探针设计
        2.4 荧光PCR反应体系的建立及优化
        2.5 灵敏度检测
    3 结果与分析
        3.1 实时荧光PCR反应体系的建立
        3.2 实时荧光PCR的特异性验证
        3.3 荧光PCR灵敏度检测
    4 讨论
第八章 全文总结
攻读学位期间发表的学术论文和专利授权
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]美国白蛾发生现状及治理策略探讨[J]. 林晓,邱立新,曲涛,卢修亮.  中国森林病虫. 2016(05)
[2]苏云金杆菌与灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫围食膜的破坏研究[J]. 徐明,徐福元,吴小芹.  南京林业大学学报(自然科学版). 2016(03)
[3]DNA条形码技术在农林入侵害虫鉴定与溯源研究中的应用[J]. 王玉生,万方浩,张桂芬.  中国科学:生命科学. 2016(05)
[4]松墨天牛包囊蛋白基因的克隆及表达特性分析[J]. 毛珊珊,吴华俊,林同.  中南林业科技大学学报. 2016(01)
[5]DNA条形码试剂盒检测技术在墨天牛鉴定中的应用[J]. 陈梦义,徐梅,钱路,安榆林,郝德君.  南京林业大学学报(自然科学版). 2015(06)
[6]珠海口岸首次截获南非石竹卷蛾[J]. 徐淼锋,迟远丽,黄永辉,钱路,水克娟,周昱晨,张卫东,权永兵,廖力.  植物检疫. 2015(05)
[7]广州机场局从旅客携带物多次截获石榴螟[J]. 章柱,余辛,梁帆.  植物检疫. 2015(04)
[8]DNA条形码技术在几种苹果园鳞翅目害虫鉴定中的应用[J]. 李晓叶,钱路,陈茂华.  西北农业学报. 2015(05)
[9]珠海局全国首次截获重要害虫酸豆黑脉斑螟[J]. 徐淼锋,廖力,权永兵,张卫东,王星.  植物检疫. 2015(01)
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博士论文
[1]基于线粒体基因对苹果蠹蛾和梨小食心虫不同地理种群遗传结构的研究[D]. 李亦松.中国农业大学 2015
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硕士论文
[1]口岸截获天牛科昆虫DNA条形码试剂盒的研究[D]. 陈梦义.南京林业大学 2015
[2]口岸截获小蠹科昆虫DNA条形码技术研究[D]. 常虹.南京林业大学 2013
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[4]食品果实中不同地理种群舞毒蛾分子鉴定研究[D]. 林瑶.上海海洋大学 2013
[5]基于DNA条形码技术的重楼正伪品鉴定方法研究[D]. 姜黎.泸州医学院 2013
[6]DNA条形码技术在我国常见蓟马种类识别及西花蓟马传播扩散趋势分析中的应用[D]. 乔玮娜.中国农业科学院 2012
[7]检疫性乳白蚁系统发育及分子鉴定技术研究[D]. 权永兵.江西农业大学 2012
[8]基于COI基因的苹果蠹蛾地理种群遗传差异分析及幼虫快速分子鉴定[D]. 董昆.西北农林科技大学 2010
[9]DNA条形码候选序列在百合科植物鉴定中的应用[D]. 吴春颖.北京林业大学 2009
[10]中国进口货物木质包装传带有害生物风险分析报告[D]. 王益愚.北京林业大学 2007



本文编号：3713282