豌豆蚜点滴与注射法递送dsRNA介导的RNAi效率及其摄取机制研究

发布时间：2023-11-18 14:23

　　RNAi是研究真核生物基因功能的重要方法,也被认为是农业害虫防控的潜在技术。豌豆蚜Acyrthosiphon pisum是重要农业害虫,同时也是重要的模式生物,除了可以通过直接刺吸的方式掠取植物营养,分泌蜜露引起煤烟病,还是多种植物病毒的重要传播媒介。目前普遍认为,蚜虫的RNAi效率存在不稳定性。因此,研究针对蚜虫的dsRNA递送体系、RNAi效率及dsRNA摄取机制具有重要的科学意义。本学位论文通过比较研究豌豆蚜的两种dsRNA递送体系,多层面地评价这两种体系处理的RNAi效率;检测dsRNA处理后siRNA通路关键基因的诱导活性;评价豌豆蚜不同种群在两种技术体系处理下的RNAi效率,明确点滴法和注射法RNAi效率的差异,更深层次地探索蚜虫体型大小、病毒侵染、血淋巴对dsRNA降解速率与豌豆蚜种群间RNAi效率的差异间的关系;最后,利用“RNAi of RNAi”报告系统揭示Apsid–1与内吞作用参与豌豆蚜dsRNA摄取的分子机制。主要研究结果如下:1点滴法RNAi优于注射法RNAi通过研究构建注射法RNAi和点滴法RNAi技术体系,以Aphb为指示基因,分别评价两种技术体系下ds...

【文章页数】：170 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 昆虫RNAi的机制及影响其效率的因素
    2 dsRNA的不同递送方式
    3 细胞摄取外源dsRNA的机制研究现状
    4 蚜虫RNAi的研究现状
    5 学位论文研究的目的与意义
    6 研究内容与技术路线
第二章 注射法与点滴法介导的豌豆蚜RNAi效率评价
    第一节 豌豆蚜RNAi的剂量效应和时间效应
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第二节 豌豆蚜不同靶基因RNAi效率的比较
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第三节 dsRNA在蚜虫体内的荧光定位分析
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    本章讨论
第三章 不同dsRNA递送方式对豌豆蚜siRNA通路关键基因表达的影响
    第一节 豌豆蚜siRNA通路关键基因鉴定及空间表达分析
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第二节 豌豆蚜siRNA通路关键基因的诱导活性
        1 材料与方法
        2 结果分析
        3 小结
    本章讨论
第四章 豌豆蚜不同种群RNAi效率差异及影响因素分析
    第一节 豌豆蚜不同种群RNAi效率评价
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第二节 豌豆蚜RNA病毒的鉴定及在不同种群中的感染频率
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第三节 豌豆蚜不同种群体型参数测定
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第四节 豌豆蚜DNA/RNA非特异性降解酶基因鉴定
        1 材料与方法
        2.结果与分析
        3 小结
    本章讨论
第五章 豌豆蚜细胞摄取外源dsRNA的机制研究
    第一节 豌豆蚜Apsid–1 基因与内吞作用关键基因的鉴定及时空表达模式分析
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第二节 dsRNA点滴对Apsid–1 和内吞作用相关基因表达的影响
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    第三节 利用RNAi of RNAi报告系统解析Apsid–1 和内吞作用关键基因的功能
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 小结
    本章讨论
第六章 主要结论、创新点及研究展望
    1 主要结论
    2 创新点
    3 研究展望
参考文献
博士在读期间发表的论文及参加科研项目情况
致谢



本文编号：3865465