柑橘溃疡病菌分离鉴定、全基因组测序及防治药剂筛选

发布时间：2023-12-10 09:39

　　柑橘溃疡病(Citrus canker)为世界检疫性病害,是柑橘重要的病害之一,在我国主要由柑橘黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起。为了明确湛江地区柑橘溃疡病的病原类型并筛选出有效的防治药剂,本研究以染病柠檬叶片为材料进行病原菌的分离鉴定,利用Nanopore三代测序技术平台进行病原菌全基因组测序,采用平板稀释分离、形态学观察和16S序列分析对病叶内生菌分离鉴定后进行平板对峙试验,检测内生细菌与柑橘黄单胞的相互作用,并通过抑菌圈法检测了几种常用药剂对柑橘溃疡病菌的抑制效果。1.从疑似柑橘溃疡病的柠檬病叶上分离到病原菌菌株zlm1908,通过形态学观察、生理生化指标测定及分子生物学鉴定,确定该病原菌为柑橘黄单胞柑橘亚种(Xcc),离体接种在柠檬和红江橙叶片上,均产生典型的溃疡症状。2.全基因组测序结果表明菌株zlm1908的基因组大小为5.19 Mb,含有1条5,192,880 bp的染色体和2条长度分别为34,099 bp和119,114 bp的环状质粒,GC含量为64.67%。比较基因组研究发现菌株zlm1908与源自江西的jx-...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 柑橘溃疡病及其病原菌研究进展
        1.1.1 柑橘溃疡病的症状特点
        1.1.2 柑橘溃疡病病原的特征
        1.1.3 柑橘溃疡病病原的分类和命名
    1.2 柑橘溃疡病的防治研究进展
        1.2.1 检疫防控
        1.2.2 农业防治
        1.2.3 化学防治
    1.3 内生菌及其应用研究进展
        1.3.1 内生菌的概述
        1.3.2 内生菌的拮抗作用机理
        1.3.3 芽孢杆菌在柑橘溃疡病生物防治中的应用
    1.4 基因组学的研究进展
        1.4.1 全基因组测序技术的发展
        1.4.2 细菌全基因组测序的应用
        1.4.3 柑橘溃疡病菌基因组学研究
    1.5 技术路线
    1.6 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 供试培养基
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂
    2.2 方法
        2.2.1 病原菌的分离纯化
        2.2.2 病原菌的形态学观察
        2.2.3 病原菌的分子生物学鉴定
        2.2.4 病原菌的致病性测定
        2.2.5 病原菌的生理生化测定
        2.2.6 病原菌的全基因组测序
        2.2.7 比较基因组学
        2.2.8 内生细菌的分离与鉴定
        2.2.9 拮抗菌株筛选及抑菌试验
        2.2.10 杀菌剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定
        2.2.11 数据统计分析
3 结果与分析
    3.1 病原菌的分离纯化
    3.2 病原菌的形态学观察
        3.2.1 鞭毛及荚膜观察
        3.2.2 革兰氏染色观察
    3.3 病原菌的分子生物学鉴定
    3.4 病原菌的致病性测定
    3.5 病原菌的生理生化测定
    3.6 病原菌的全基因组测序
        3.6.1 数据过滤统计
        3.6.2 基因组组装
        3.6.3 基因组组分分析与预测
        3.6.4 基因组功能注释
        3.6.5 蛋白亚细胞定位分析
        3.6.6 基因组圈图分析
    3.7 柑橘溃疡病菌的比较基因组学分析
    3.8 内生菌的分离与鉴定
        3.8.1 内生菌的分离纯化及菌落形态观察
        3.8.2 内生菌的分子鉴定
    3.9 拮抗菌株筛选及抑菌试验
        3.9.1 平板抑菌试验
        3.9.2 拮抗菌株菌落形态观察
    3.10 杀菌剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定
        3.10.1 供试药剂对柑橘溃疡病菌的室内毒力测定
        3.10.2 供试药剂对柑橘溃疡病菌的毒力回归方程
4 结论与讨论
    4.1 结论
    4.2 讨论
    4.3 有待进一步研究的问题
参考文献
附录1
附录2
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3872254