一种抗虫抗除草剂转基因玉米的分子特征和遗传稳定性检测

发布时间：2024-02-19 19:27

　　玉米(Zea mays L.)是世界上重要的粮食作物、饲料原料和能源作物。随着生物技术的发展,通过转基因方法培育抗虫抗除草剂玉米新品种是解决虫害和杂草问题和保障玉米产量的有效方法。本实验室以前获得了抗虫耐除草剂玉米转化体ZD12-6。该转化体是将Bt融合基因Cry1Ab/Cry2Aj和抗草甘膦基因G10evo-epsps构建在一个T-DNA中并通过农杆菌介导转化获得。与单个Bt蛋白相比,融合蛋白Cry1Ab/Cry2Aj可以扩大杀虫谱并减缓害虫抗性的发生和发展,有利于转基因玉米品种的长期使用。本研究对ZD12-6进行了 Southern分析,结果表明ZD12-6是外源T-DNA单拷贝插入的转化体。本研究进一步通过TailPCR确定了插入位点的旁侧DNA序列,并建立了 ZD12-6转化体的PCR特异性检测方法。这个方法为今后转基因玉米的身份验证和监控通过了技术保障。本研究检测分析了抗虫抗除草剂玉米ZD12-6的遗传稳定性及抗虫抗除草剂的性能。通过PCR、Western blot和ELISA等方法对ZD12-6不同代次材料进行检测分析,结果显示ZD12-6中的外源目标基因在DNA水平和蛋白...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．３?Ｃｒｙ毒素作用机制：孔洞模型（Ｂｒａｖｏ?ｅｔａｌ．，２０１２）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｍｏｄｅ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ?ａｔ?ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｌｅｖｅｌ（Ｂｒａｖｏ?ｅｔ?ａｌ．，２０１２）??

膜上Ｇ蛋白亚基和腺苷酸环化酶（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ?ｃｙｃｌａｓｅ，ＡＣ），使环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平提高，??进一步激活蛋白激酶Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅｓ?Ａ，ＰＫＡ），ＰＫＡ调控细胞凋亡相关基因表达，导致细??胞膜离子通道紊乱离子外流和细胞骨架的重组，最终细胞死亡凋亡....

图１．４?Ｃｒｙ毒素作用机制：信号传导模型（Ｚｈａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００６）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ：?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｍｏｄｅｌ?（Ｚｈａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００６）??

ＡＶ／?＝?２６７？Ｍ?ＡＪ－Ｉ０１？Ｍ?ＡＶ／＾．ＳｎＭ?ＡＶ／＝?０．６?ｎＭ??图１．３?Ｃｒｙ毒素作用机制：孔洞模型（Ｂｒａｖｏ?ｅｔａｌ．，２０１２）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｍｏｄｅ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ?ａｔ?ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｌｅｖｅ....

图２．２．插入序列功能区域结构图??

２．１．１楦物材料??供试玉米：本试验的转基因玉米为转化体“ＺＤ?１２－６”通过杂交和回交转育到“郑５８”自??交系后的第四第五第六代，如图２．１。该转化体是导入Ｇ／０ｅｖｏ－ｅ；ｗ；ｗ基因和ＯｙＬ＾／〇７２４／??融合基因的抗虫耐草甘膦转基因玉米，插入序列全长约ｌ〇．８ｋｂ，其....

图３．１不同代次的转基因玉米外源基因的ＰＣＲ鉴定??

检测目的基因以６／０＾２４／和Ｇ川的整合情况，结果显示在Ｔ４－Ｔ６代的不同植株中均检??测到与预期大小一致的ＤＮＡ片段，Ｇ川基因扩增到的片段大小为８００ｂｐ，Ｃ〇＾Ｚ）／〇７２４／??基因扩增到的片段大小为１５００ｂｐ?（图３．１）。由此说明插入的外源基因在不同代次的转基??因植....

本文编号：3903204