拟南芥非典型NLR蛋白TN13在植物免疫中的功能分析

发布时间：2024-02-21 00:26

　　面对病原菌攻击时,植物因其固着生长方式不能移动,因此进化出了一套自身先天免疫系统对抗病原菌的侵害。在植物先天免疫中,核苷酸结合-富含亮氨酸重复序列NLR(Nucleotide binding-leucine rich repeat)蛋白可以识别来自病原菌的效应因子发挥重要作用。TN(TIR-NBS)蛋白是其中一类非典型NLR蛋白,缺少富含亮氨酸重复序列,但是TN蛋白参与植物免疫的作用机制尚不清楚。拟南芥RPS5(PSEUDOMONAS SYRINGAE 5)是一个典型的CNL(CC-NBS-LRR)类NLR蛋白,可以识别丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)III型效应因子Avr Pph B激活下游抗性,但是RPS5介导的免疫途径是否需要其它NLR蛋白未见报道。为了探究TNs蛋白在植物免疫中的功能以及是否参与RPS5介导的植物免疫,我们首先通过荧火素酶互补实验LUC(Split-Luciferase Complementation)筛选与RPS5存在相互作用的TNs蛋白,发现TN13和TN21与RPS5都存在相互作用。后续表型分析显示只有tn13-2突变体表现出对P...

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 植物病原菌
    1.2 植物天然免疫系统
        1.2.1 PTI反应
        1.2.2 模式识别受体(PRRs)
        1.2.3 ETI反应
        1.2.4 R蛋白的结构与功能
        1.2.5 R蛋白的激活
        1.2.6 R蛋白对在植物免疫反应中的作用
        1.2.7 ETI下游信号通路和免疫反应
        1.2.8 非典型R蛋白在植物免疫中的功能
    1.3 本论文的选题意义和研究目标
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料和试剂
        2.1.1 拟南芥材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 载体
        2.1.4 酶和其他分子生物学试剂
    2.2 实验仪器
    2.3 培养基和常用溶液
        2.3.1 常用培养基
        2.3.2 植物基因组DNA提取液
        2.3.3 植物蛋白提取相关溶液
        2.3.4 western blot相关溶液
    2.4 实验方法
        2.4.1 植物播种和生长条件
        2.4.2 丁香假单胞杆菌接菌实验
        2.4.3 植物基因组DNA提取实验
        2.4.4 植物总RNA的提取和反转录
        2.4.5 实时定量PCR
        2.4.6 PCR获得目的基因
        2.4.7 限制性内切酶进行双酶切
        2.4.8 T4连接酶进行载体与片段的连接
        2.4.9 Gateway系统连接酶进行载体与片段的连接
        2.4.10 同源重组进行载体与片段的连接
        2.4.11 大肠杆菌感受态的制备
        2.4.12 大肠杆菌感受态转化
        2.4.13 农杆菌感受态的制备
        2.4.14 农杆菌感受态的转化
        2.4.15 阳性菌落的鉴定
        2.4.16 农杆菌介导的烟草瞬时表达
        2.4.17 农杆菌介导的拟南芥转化
        2.4.18 植物总蛋白提取
        2.4.19 免疫共沉淀实验
        2.4.20 western blot实验
        2.4.21 荧火素酶互补实验
        2.4.22 BiFC实验
第三章 结果与分析
    3.1 TNs蛋白与RPS5 相互作用的初步筛选
    3.2 tn13-2和tn21-1 T-DNA插入突变体的鉴定
    3.3 tn13-2 突变体表现出对Pto DC3000 avr Pph B增强的感病性
    3.4 tn13-2 tn21-1 双突变体没有表现出对Pto DC3000 avr Pph B更强的感病性
    3.5 TN13基因互补了tn13-2的表型
    3.6 TN13部分参与RPS5介导的植物免疫
    3.7 TN13 特异参与了植物对细菌Pto DC3000 avr Pph B的抗性
    3.8 TN13与RPS5相互作用
    3.9 TN13 主要与RPS5的CC结构域相互作用
第四章 结论与讨论
    4.1 TN13特异且部分参与RPS5介导的植物免疫
    4.2 TN13 可能作为RPS5 一个“Helper”蛋白发挥功能
    4.3 TN13参与RPS5介导植物免疫的工作模型
    4.4 主要结论
参考文献
附录
攻读学位期间的学术论文与研究成果
致谢



本文编号：3904754