检测柑橘黄龙病菌的引物筛选及湖南省黄龙病菌遗传多样性分析

发布时间：2024-04-12 05:05

　　柑橘黄龙病(Candidatus Liberibacter,spp)是柑橘病害中最重要的病害之一,同时也是柑橘病害中重要的检疫性有害生物,病原菌为韧皮部杆菌(Candidatus Liberiba cter spp)。柑橘产业因黄龙病的影响造成每年巨大的经济损失。我国最先发现柑橘黄龙病的地区是广东省,在几年前湖南省还属于柑橘黄龙病发生的偶发区,随着信息和物流更加便捷有毒苗木跨地区的运输,同时随着全球气温的升高扩大了柑橘木虱的活动范围,我省的柑橘黄龙病已经成区域性存在,甚至有向全省蔓延的趋势。为了确定目前湖南省的柑橘黄龙病具体分布情况、最适宜的检测方法、以及不同地方不同寄主的柑橘黄龙病病原菌的差异性。筛选出一对特异性和灵敏度高的引物,对湖南省疑似柑橘黄龙病的样品同时采用常规PCR、巢式PCR和LAMP等不同的方法进行检测,进行灵敏度比较和应用分析,最后通过分析不同地区和不同寄主的柑橘黄龙病病原菌16S rRNA、gyrB和omp基因序列的差异性。最后得到试验结果如下:1、通过常规PCR筛选引物F3/B3、F1/B1、gyr1/gyr2、OI1/OI2和16s3/16s4共5对引物,得到引...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1引物F1/B1（A)、16s3/16s4(B)、gyr1/gyr2(C)、F3/B3(D)和OI1/OI2(E)常规PCR检测灵敏

-C）；引物F3/B3最高可以检测到1000×10-2ng/μg（图2-1-D)；引物OI1/OI2最高可以检测到1000×10-1ng/μg（图2-1-E)。从扩增结果可的，引物F3/B3和OI1/OI2扩增片段都属于较长片段（片段大小都在1100pb....

图2-3可视化LAMP灵敏度检测比较

kDL2000；1-10：依次为1000×10-1、1000×10-2、1000×10-3、1000×10-4、1000×10-5、1000×1×10-7、1000×10-8、1000×10-9、1000×10-10ng/μg的DNA梯度稀释。图2-3可视化LAM....

图2-4疑似橘黄龙病（症状：斑驳）常规PCR（A）、巢式PCR（B）和可视化LAMP（C）检测比较

17LAMP（C）M：MarkDL2000；+：阳性对照；-：阴性对照图2-4疑似橘黄龙病（症状：斑驳）常规PCR（A）、巢式PCR（B）和可视化LAMP（C）检测比较Fig2-4Thesuspecteddisease(symptoms:mottledor....

图2-5引物OI1/OI2和F1/B1常规PCR验证试验结果

顶枯36554494612其他症状3633225147A-E:从左往右以引物F1/B1、16S3/16S4、gyr1/gyr2、F3/B3和OI1/OI2为常规PCR；AD-BE:分别代表引物F3/B3→F1/B1和OI1/OI2....

本文编号：3951707