长白落叶松体细胞胚胎发生及遗传转化研究
发布时间：2021-02-10 07:32
长白落叶松具有抗逆性强及早期速生等优点,为北半球温带山区与寒带气候条件下重要的速生用材树种,具有很高的生态价值与经济价值。但长白落叶松杂合性高、有性生殖产生的子代变异较大,而扦插及不定芽再生途径等无性繁殖方式也存在生根率较低、成苗困难等问题,通过传统的育种方法无法满足快速遗传改良的需求。因此,本研究以长白落叶松未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织,建立并优化了体细胞胚胎发生体系、胚性愈伤组织的悬浮培养体系及农杆菌介导的遗传转化体系,并在此基础上,对处于不同发育阶段的体细胞胚的理化特性进行了初步研究。主要研究结果如下:（1）长白落叶松授粉70天后采集的合子胚适合诱导胚性愈伤组织,基本培养基为BM,添加2,4-D 1.5 mg·L-1、BA 0.5 mg·L-1及KT 0.5 mg·L-1,且不同无性系间的诱导率存在一定差异。（2）胚性愈伤组织在含2,4-D 0.3 mg·L-1、BA 0.1 mg·L-1及KT 0.1 mg·L-1的BM培养基中可迅速增殖并...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：154 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
针叶树的体细胞胚胎发生过程
探讨长白落叶松胚性愈伤组织对 3 种抗生素的敏感性，并在此基础上农杆菌及基因枪介导的遗传转化研究，建立遗传转化体系并对转化条件进行，为长白落叶松的遗传发育机制研究及分子育种奠定基础。.1 材料与方法.1.1 试验材料.1.1.1 植物材料以长白落叶松胚性细胞系为研究对象，取增殖培养约 14 天的新鲜胚性愈织为植物材料进行试验。.1.1.2 菌种与质粒本研究所用大肠杆菌菌株所含质粒带有 β-葡萄糖苷酶（GUS）基因、潮霉酸转移酶基因（hpt）以及壮观霉素抗性基因（aadA）等选择标记基因，由林业大学林木遗传育种国家重点实验室李成浩教授提供。
6.2.9 基因枪介导遗传转化的结果通过基因枪介导长白落叶松胚性愈伤组织的转化，没有获得瞬时或稳定表达外源基因的抗性组织。推测这可能和基因枪介导外源基因整合的特点有关。外源基因在外力的作用下虽然能够进入多数受体细胞，但整合困难；即便成功整合到受体基因组中也常会发生基因重排或丢失，导致外源基因在转录或转录后水平的沉默。因此，在后续的研究中还需对转化方法进行改进，如改善受体组织的生理状态、改变微载体的种类与颗粒大小、调节破裂盘与载体膜的距离及受体组织与终止屏的距离等。6.2.10 抗性组织的 PCR 检测结果从获得的 Hyg 抗性细胞系中随机挑选 16 个，提取总 DNA 作模板进行 PCR检测。以 35S 启动子序列设计引物，未侵染组织及农杆菌菌液分别作为阴性对照及阳性对照对。PCR 扩增产物的琼脂糖电泳结果如图 6-10 所示：M N P 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
【参考文献】：
期刊论文
[1]长白落叶松胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生[J]. 宋跃,甄成,张含国,李淑娟. 林业科学. 2016(10)
[2]落叶松胚性愈伤组织诱导与未成熟胚形态的关系[J]. 宋跃,张含国,李淑娟,李树久. 东北林业大学学报. 2016(04)
[3]云杉未成熟合子胚诱导体细胞胚胎发生[J]. 张建伟,王军辉,李青粉,马建伟. 林业科学. 2014(04)
[4]马尾松胚性细胞悬浮增殖培养体系的建立[J]. 史昆,杨模华,李志辉,张冬林,王茜,丁贵杰. 中南林业科技大学学报. 2014(01)
[5]华北落叶松胚性愈伤组织诱导影响因子的研究[J]. 韩登媛,李旦,赵健,李慧,张金凤. 林业科学研究. 2013(04)
[6]麻疯树悬浮细胞系的建立与优化[J]. 王琼,孔倩倩,李志辉,陈介南. 生物技术通报. 2012(10)
[7]3种酶液和H2O2处理对水曲柳体胚发生的影响（英文）[J]. 孙倩,杨玲,沈海龙,李玉花. Agricultural Science & Technology. 2012(08)
[8]云南松胚性愈伤组织诱导及增殖[J]. 于大德,肖宁,王企珂,王晟,胡冬梅,张金凤. 西北植物学报. 2011(10)
[9]马尾松幼胚体细胞胚胎发生研究[J]. 杨模华,张冬林,李志辉,靳小翠,丁贵杰. 植物生理学报. 2011(09)
[10]日本落叶松体细胞胚胎发生的研究[J]. 汪小雄,杨映根. 安徽农业科学. 2010(04)
博士论文
[1]日本落叶松×华北落叶松体细胞胚胎发生的生化机制和分子机理研究[D]. 张蕾.中国林业科学研究院 2008
[2]华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D]. 齐力旺.中国林业科学研究院 2000
硕士论文
[1]毛果杨组培再生及遗传转化体系研究[D]. 甄成.东北林业大学 2016
[2]基于成熟合子胚外值体的水曲柳高频体胚发生研究[D]. 边磊.东北林业大学 2013
[3]基于干细胞模型的落叶松遗传转化体系的建立及优化[D]. 朱彩虹.中国林业科学研究院 2011
[4]利用胚性愈伤组织进行落叶松遗传转化体系的研究[D]. 王静.中国林业科学研究院 2007
本文编号：3027016
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：154 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
针叶树的体细胞胚胎发生过程
探讨长白落叶松胚性愈伤组织对 3 种抗生素的敏感性，并在此基础上农杆菌及基因枪介导的遗传转化研究，建立遗传转化体系并对转化条件进行，为长白落叶松的遗传发育机制研究及分子育种奠定基础。.1 材料与方法.1.1 试验材料.1.1.1 植物材料以长白落叶松胚性细胞系为研究对象，取增殖培养约 14 天的新鲜胚性愈织为植物材料进行试验。.1.1.2 菌种与质粒本研究所用大肠杆菌菌株所含质粒带有 β-葡萄糖苷酶（GUS）基因、潮霉酸转移酶基因（hpt）以及壮观霉素抗性基因（aadA）等选择标记基因，由林业大学林木遗传育种国家重点实验室李成浩教授提供。
6.2.9 基因枪介导遗传转化的结果通过基因枪介导长白落叶松胚性愈伤组织的转化，没有获得瞬时或稳定表达外源基因的抗性组织。推测这可能和基因枪介导外源基因整合的特点有关。外源基因在外力的作用下虽然能够进入多数受体细胞，但整合困难；即便成功整合到受体基因组中也常会发生基因重排或丢失，导致外源基因在转录或转录后水平的沉默。因此，在后续的研究中还需对转化方法进行改进，如改善受体组织的生理状态、改变微载体的种类与颗粒大小、调节破裂盘与载体膜的距离及受体组织与终止屏的距离等。6.2.10 抗性组织的 PCR 检测结果从获得的 Hyg 抗性细胞系中随机挑选 16 个，提取总 DNA 作模板进行 PCR检测。以 35S 启动子序列设计引物，未侵染组织及农杆菌菌液分别作为阴性对照及阳性对照对。PCR 扩增产物的琼脂糖电泳结果如图 6-10 所示：M N P 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
【参考文献】：
期刊论文
[1]长白落叶松胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生[J]. 宋跃,甄成,张含国,李淑娟. 林业科学. 2016(10)
[2]落叶松胚性愈伤组织诱导与未成熟胚形态的关系[J]. 宋跃,张含国,李淑娟,李树久. 东北林业大学学报. 2016(04)
[3]云杉未成熟合子胚诱导体细胞胚胎发生[J]. 张建伟,王军辉,李青粉,马建伟. 林业科学. 2014(04)
[4]马尾松胚性细胞悬浮增殖培养体系的建立[J]. 史昆,杨模华,李志辉,张冬林,王茜,丁贵杰. 中南林业科技大学学报. 2014(01)
[5]华北落叶松胚性愈伤组织诱导影响因子的研究[J]. 韩登媛,李旦,赵健,李慧,张金凤. 林业科学研究. 2013(04)
[6]麻疯树悬浮细胞系的建立与优化[J]. 王琼,孔倩倩,李志辉,陈介南. 生物技术通报. 2012(10)
[7]3种酶液和H2O2处理对水曲柳体胚发生的影响（英文）[J]. 孙倩,杨玲,沈海龙,李玉花. Agricultural Science & Technology. 2012(08)
[8]云南松胚性愈伤组织诱导及增殖[J]. 于大德,肖宁,王企珂,王晟,胡冬梅,张金凤. 西北植物学报. 2011(10)
[9]马尾松幼胚体细胞胚胎发生研究[J]. 杨模华,张冬林,李志辉,靳小翠,丁贵杰. 植物生理学报. 2011(09)
[10]日本落叶松体细胞胚胎发生的研究[J]. 汪小雄,杨映根. 安徽农业科学. 2010(04)
博士论文
[1]日本落叶松×华北落叶松体细胞胚胎发生的生化机制和分子机理研究[D]. 张蕾.中国林业科学研究院 2008
[2]华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D]. 齐力旺.中国林业科学研究院 2000
硕士论文
[1]毛果杨组培再生及遗传转化体系研究[D]. 甄成.东北林业大学 2016
[2]基于成熟合子胚外值体的水曲柳高频体胚发生研究[D]. 边磊.东北林业大学 2013
[3]基于干细胞模型的落叶松遗传转化体系的建立及优化[D]. 朱彩虹.中国林业科学研究院 2011
[4]利用胚性愈伤组织进行落叶松遗传转化体系的研究[D]. 王静.中国林业科学研究院 2007
本文编号：3027016
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