管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶基因的克隆与功能研究
发布时间：2021-02-23 02:09
毒液作为寄生蜂调控寄主的重要作用物,有关其生理功能的研究主要集中在茧蜂科和姬蜂科,且迄今仅极少数的寄生蜂毒液蛋白生理功能被探明。有鉴于此,本研究以隶属于肿腿蜂科的管氏肿腿蜂Scleroderma guani为研究对象,在研究该蜂毒液生理功能的同时,对该蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因进行了克隆,并对其生理功能进行了系统研究。结果如下:经寄生和体外注射毒液的方法研究发现,管氏肿腿蜂毒液能麻痹寄主黄粉甲蛹,抑制寄主生长发育,并降低寄主羽化率。此外,该蜂毒液能引起寄主体内血细胞总数、颗粒血细胞和浆血细胞数量增加,抑制寄主颗粒血细胞及浆血细胞的延展,导致寄主血细胞的死亡,抑制寄主血淋巴酚氧化酶的活性。采用RT-PCR技术,克隆获得的管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶基因和丝氨酸蛋白酶基因,其开放阅读框分别为1872 bp和798 bp,编码623个和265个氨基酸,理论分子量分别为71.84 kDa和30.53 kDa。进化树分析表明,管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶隶属于gluzincin超家族中的M13家族,明显有别于已报道的其他寄生蜂毒液金属蛋白酶隶属于metzincin超家族中的M12家族。荧光定量P...
【文章来源】：西南林业大学云南省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 寄生蜂毒液的生化特性
1.2 寄生蜂毒液蛋白组分
1.2.1 酶类
1.2.2 麻痹素
1.2.3 抗菌物质
1.2.4 抑制剂
1.2.5 其他毒液成分
1.3 寄生蜂毒液的生理功能
1.3.1 对寄主生长发育的调控
1.3.2 对寄主的麻痹作用
1.3.3 对寄主体液免疫的调控
1.3.4 对寄主细胞免疫的调控
1.3.5 毒液的其他作用
1.4 研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 菌种和质粒
2.1.3 试剂、试剂盒及工具酶
2.1.4 主要溶液及配制
2.1.5 SDS-PAGE电泳试剂
2.1.6 Westernblot主要试剂
2.1.7 培养基
2.1.8 设备及仪器
2.2 试验方法
2.2.1 管氏肿腿蜂和黄粉甲
2.2.2 毒液蛋白制备
2.2.3 寄生
2.2.4 毒液微量注射
2.2.5 毒液生理功能
2.2.6 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因的克隆
2.2.7 基因测序及序列分析
2.2.8 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因表达特征
2.2.9 毒液基因原核表达
2.2.10 毒液基因原核表达产物生理功能
2.2.11 数据统计分析
3 结果与分析
3.1 管氏肿腿蜂毒液的生理功能
3.1.1 对寄主的麻痹作用
3.1.2 对寄主生长发育的影响
3.1.3 对寄主细胞免疫的影响
3.1.4 对寄主体液免疫的影响
3.2 金属蛋酶与丝氨酸蛋白基因的序列分析
3.3 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因的表达特征
3.3.1 金属蛋白酶基因
3.3.2 丝氨酸蛋白酶基因
3.4 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶基因的原核表达
3.4.1 金属蛋白酶
3.5 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶的生理功能
3.5.1 对寄主的麻痹作用
3.5.2 对寄主生长发育的影响
3.5.3 对寄主细胞免疫的影响
3.5.4 对寄主体液免疫的影响
3.6 管氏肿腿蜂毒液丝氨酸蛋白酶生理功能
3.6.1 对寄主的麻痹作用
3.6.2 对寄主生长发育的影响
3.6.3 对寄主细胞免疫的影响
3.6.4 对寄主体液免疫的影响
4. 讨论与结论
4.1 讨论
4.1.1 管氏肿腿蜂毒液生理功能
4.1.2 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶与丝氨酸蛋白酶基因序列及表达
4.1.3 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶与丝氨酸蛋白酶生理功能
4.2 结论
5 创新点
参考文献
个人简介
导师简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄粉甲肌动蛋白解聚因子基因的克隆及表达分析[J]. 李丽芳,赵满,黄镜梅,Elena N.Elpidina,朱家颖. 生物技术. 2016(02)
[2]川硬皮肿腿蜂毒液对寄主黄粉虫蛹的影响[J]. 卓志航,杨伟,覃欢,杨春平,杨桦,徐丹萍. 应用生态学报. 2013(11)
[3]蛇毒金属蛋白酶[J]. 张雷,刘明华. 中国急救医学. 2013 (11)
[4]川硬皮肿腿蜂毒液蛋白的分离纯化[J]. 卓志航,杨伟,覃欢,杨春平,杨桦,徐丹萍. 林业科学. 2013(10)
[5]管氏肿腿蜂雌性抚育中幼虫转移行为的启动和节律[J]. 伍绍龙,徐福元,李保平,孟玲. 昆虫学报. 2013(04)
[6]沙蚕金属蛋白酶体外抗凝血与溶栓作用[J]. 邓志会,孙东升,李波,肖微. 中国老年学杂志. 2012(21)
[7]中红侧沟茧蜂与寄主粘虫之间的生理调控机制[J]. 王士军. 广东农业科学. 2012(08)
[8]半闭弯尾姬蜂寄生对寄主小菜蛾幼虫体液免疫的影响[J]. 黄芳,时敏,陈学新,章金明. 环境昆虫学报. 2011(02)
[9]昆虫酚氧化酶作用机制的研究进展[J]. 徐亚玲,李文楚. 安徽农业科学. 2010(27)
[10]蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶血细胞骨架相关蛋白基因的转录调控[J]. 朱家颖,叶恭银,方琦,李艳敏,胡萃. 昆虫学报. 2010(08)
博士论文
[1]蝶蛹金小蜂寄生对寄主转录组的影响及三种毒蛋白分子特性分析[D]. 朱宇.浙江大学 2015
[2]小菜蛾两种重要内寄生蜂的毒液分子特性研究[D]. 赵伟.浙江大学 2013
[3]丽蝇蛹集金小蜂毒液蛋白组分的鉴定及PACIFASTIN类和KAZAL类基因的功能分析[D]. 钱岑.浙江大学 2013
[4]蝶蛹金小蜂毒液蛋白质组与四个毒液蛋白生理功能的分析[D]. 王磊.浙江大学 2012
[5]蝶蛹金小蜂毒液抑制菜粉蝶蛹免疫反应的分子机理研究[D]. 方琦.浙江大学 2010
[6]蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶蛹细胞免疫与生理代谢的影响[D]. 张倩倩.浙江大学 2009
[7]蝶蛹金小蜂毒液分子特性及其调控寄主分子机理的研究[D]. 朱家颖.浙江大学 2009
[8]颈双缘姬蜂调控寄主小菜蛾的生理机制研究[D]. 郦卫弟.浙江大学 2005
[9]蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂毒液的生化特性与生理功能[D]. 张忠.浙江大学 2005
[10]蛇毒金属蛋白酶/去整合蛋白新基因的克隆及其功能研究[D]. 王韶辉.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2003
硕士论文
[1]家蚕丝氨酸蛋白酶BmSP125在表皮发育过程中的功能研究[D]. 陈建平.西南大学 2013
[2]长尾潜蝇茧蜂寄生橘小实蝇机制的初步研究[D]. 王勇.福建农林大学 2013
[3]川硬皮肿腿蜂毒液性质及其对黄粉虫蛹的麻痹和营养代谢的影响[D]. 覃欢.四川农业大学 2012
[4]菜蛾盘绒茧蜂Cotesia vestalis毒液和萼液对寄主小菜蛾Plutella xylostella幼虫的免疫调控研究[D]. 曹婷婷.浙江大学 2008
[5]半闭弯尾姬蜂对寄主小菜蛾生理特性的影响[D]. 蒋芸芸.杭州师范大学 2007
[6]菜蛾盘绒茧蜂毒液对寄主小菜蛾生理调控机制的研究[D]. 俞瑞鲜.浙江大学 2006
[7]丽蝇蛹集金小蜂毒液性质及其寄生的生理学效应[D]. 张焘.浙江大学 2003
本文编号：3046859
【文章来源】：西南林业大学云南省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 寄生蜂毒液的生化特性
1.2 寄生蜂毒液蛋白组分
1.2.1 酶类
1.2.2 麻痹素
1.2.3 抗菌物质
1.2.4 抑制剂
1.2.5 其他毒液成分
1.3 寄生蜂毒液的生理功能
1.3.1 对寄主生长发育的调控
1.3.2 对寄主的麻痹作用
1.3.3 对寄主体液免疫的调控
1.3.4 对寄主细胞免疫的调控
1.3.5 毒液的其他作用
1.4 研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 菌种和质粒
2.1.3 试剂、试剂盒及工具酶
2.1.4 主要溶液及配制
2.1.5 SDS-PAGE电泳试剂
2.1.6 Westernblot主要试剂
2.1.7 培养基
2.1.8 设备及仪器
2.2 试验方法
2.2.1 管氏肿腿蜂和黄粉甲
2.2.2 毒液蛋白制备
2.2.3 寄生
2.2.4 毒液微量注射
2.2.5 毒液生理功能
2.2.6 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因的克隆
2.2.7 基因测序及序列分析
2.2.8 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因表达特征
2.2.9 毒液基因原核表达
2.2.10 毒液基因原核表达产物生理功能
2.2.11 数据统计分析
3 结果与分析
3.1 管氏肿腿蜂毒液的生理功能
3.1.1 对寄主的麻痹作用
3.1.2 对寄主生长发育的影响
3.1.3 对寄主细胞免疫的影响
3.1.4 对寄主体液免疫的影响
3.2 金属蛋酶与丝氨酸蛋白基因的序列分析
3.3 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶及丝氨酸蛋白酶基因的表达特征
3.3.1 金属蛋白酶基因
3.3.2 丝氨酸蛋白酶基因
3.4 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶基因的原核表达
3.4.1 金属蛋白酶
3.5 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶的生理功能
3.5.1 对寄主的麻痹作用
3.5.2 对寄主生长发育的影响
3.5.3 对寄主细胞免疫的影响
3.5.4 对寄主体液免疫的影响
3.6 管氏肿腿蜂毒液丝氨酸蛋白酶生理功能
3.6.1 对寄主的麻痹作用
3.6.2 对寄主生长发育的影响
3.6.3 对寄主细胞免疫的影响
3.6.4 对寄主体液免疫的影响
4. 讨论与结论
4.1 讨论
4.1.1 管氏肿腿蜂毒液生理功能
4.1.2 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶与丝氨酸蛋白酶基因序列及表达
4.1.3 管氏肿腿蜂毒液金属蛋白酶与丝氨酸蛋白酶生理功能
4.2 结论
5 创新点
参考文献
个人简介
导师简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄粉甲肌动蛋白解聚因子基因的克隆及表达分析[J]. 李丽芳,赵满,黄镜梅,Elena N.Elpidina,朱家颖. 生物技术. 2016(02)
[2]川硬皮肿腿蜂毒液对寄主黄粉虫蛹的影响[J]. 卓志航,杨伟,覃欢,杨春平,杨桦,徐丹萍. 应用生态学报. 2013(11)
[3]蛇毒金属蛋白酶[J]. 张雷,刘明华. 中国急救医学. 2013 (11)
[4]川硬皮肿腿蜂毒液蛋白的分离纯化[J]. 卓志航,杨伟,覃欢,杨春平,杨桦,徐丹萍. 林业科学. 2013(10)
[5]管氏肿腿蜂雌性抚育中幼虫转移行为的启动和节律[J]. 伍绍龙,徐福元,李保平,孟玲. 昆虫学报. 2013(04)
[6]沙蚕金属蛋白酶体外抗凝血与溶栓作用[J]. 邓志会,孙东升,李波,肖微. 中国老年学杂志. 2012(21)
[7]中红侧沟茧蜂与寄主粘虫之间的生理调控机制[J]. 王士军. 广东农业科学. 2012(08)
[8]半闭弯尾姬蜂寄生对寄主小菜蛾幼虫体液免疫的影响[J]. 黄芳,时敏,陈学新,章金明. 环境昆虫学报. 2011(02)
[9]昆虫酚氧化酶作用机制的研究进展[J]. 徐亚玲,李文楚. 安徽农业科学. 2010(27)
[10]蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶血细胞骨架相关蛋白基因的转录调控[J]. 朱家颖,叶恭银,方琦,李艳敏,胡萃. 昆虫学报. 2010(08)
博士论文
[1]蝶蛹金小蜂寄生对寄主转录组的影响及三种毒蛋白分子特性分析[D]. 朱宇.浙江大学 2015
[2]小菜蛾两种重要内寄生蜂的毒液分子特性研究[D]. 赵伟.浙江大学 2013
[3]丽蝇蛹集金小蜂毒液蛋白组分的鉴定及PACIFASTIN类和KAZAL类基因的功能分析[D]. 钱岑.浙江大学 2013
[4]蝶蛹金小蜂毒液蛋白质组与四个毒液蛋白生理功能的分析[D]. 王磊.浙江大学 2012
[5]蝶蛹金小蜂毒液抑制菜粉蝶蛹免疫反应的分子机理研究[D]. 方琦.浙江大学 2010
[6]蝶蛹金小蜂寄生对菜粉蝶蛹细胞免疫与生理代谢的影响[D]. 张倩倩.浙江大学 2009
[7]蝶蛹金小蜂毒液分子特性及其调控寄主分子机理的研究[D]. 朱家颖.浙江大学 2009
[8]颈双缘姬蜂调控寄主小菜蛾的生理机制研究[D]. 郦卫弟.浙江大学 2005
[9]蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂毒液的生化特性与生理功能[D]. 张忠.浙江大学 2005
[10]蛇毒金属蛋白酶/去整合蛋白新基因的克隆及其功能研究[D]. 王韶辉.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2003
硕士论文
[1]家蚕丝氨酸蛋白酶BmSP125在表皮发育过程中的功能研究[D]. 陈建平.西南大学 2013
[2]长尾潜蝇茧蜂寄生橘小实蝇机制的初步研究[D]. 王勇.福建农林大学 2013
[3]川硬皮肿腿蜂毒液性质及其对黄粉虫蛹的麻痹和营养代谢的影响[D]. 覃欢.四川农业大学 2012
[4]菜蛾盘绒茧蜂Cotesia vestalis毒液和萼液对寄主小菜蛾Plutella xylostella幼虫的免疫调控研究[D]. 曹婷婷.浙江大学 2008
[5]半闭弯尾姬蜂对寄主小菜蛾生理特性的影响[D]. 蒋芸芸.杭州师范大学 2007
[6]菜蛾盘绒茧蜂毒液对寄主小菜蛾生理调控机制的研究[D]. 俞瑞鲜.浙江大学 2006
[7]丽蝇蛹集金小蜂毒液性质及其寄生的生理学效应[D]. 张焘.浙江大学 2003
本文编号：3046859
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