小麦TaCIPK5、TaCIPK8基因的表达分析及与TaCBLs的互作关系

发布时间：2023-12-04 20:33

　　小麦是全球最重要的粮食作物之一,在其生长发育的各个阶段会面临诸多逆境胁迫因素的影响,比如干旱、盐渍、低温、低K⁺等,这些因素影响其产量和品质。研究小麦对这些逆境胁迫信号的感知、转导和响应机理对提高小麦的产量和品质是非常重要的。Ca²⁺作为第二信使,能够感知外界胁迫信号而做出特异的浓度改变,传递信号到下游Ca²⁺感受器,引起相应的生理生化反应来应对逆境胁迫。植物中主要存在4类Ca²⁺感受器,分别是钙调素CaM(Calmodulins),类钙调素CmL(calmodulin-like),钙依赖性蛋白激酶CDPKs(Calcium-dependent protein kinases),以及类钙调磷酸酶B蛋白CBLs(Calcineurin B-like proteins)。CBLs(Calcineurin B-like proteins)是类似于酵母和动物体内钙调磷酸酶B的一种蛋白,而CIPKs(CBL-interacting protein kinase)是CBLs互作蛋白激酶,它们与Ca^2+...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
1 文献综述
    1.1 植物逆境胁迫和应对方式
        1.1.1 植物逆境胁迫
        1.1.2 植物应对逆境胁迫的方式
    1.2 植物应对非生物胁迫的生理机制
        1.2.1 直接作用物质
        1.2.2 间接作用物质
    1.3 钙信使及钙信号的传导
        1.3.1 钙依赖蛋白激酶CDPKs
        1.3.2 钙调素CaM和类钙调素蛋白CmL
        1.3.3 CBLs蛋白及其靶蛋白CIPKs
    1.4 CBLs-CIPKs信号系统
        1.4.1 CBLs-CIPKs信号网络的机制
        1.4.2 CBLs-CIPKs信号系统的功能研究
2 引言
3 试验材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 植物材料和菌株
        3.1.2 克隆载体
        3.1.3 生化试剂和试剂盒
        3.1.4 试验仪器
        3.1.5 PCR引物
    3.2 试验方法
        3.2.1 RNA提取及反转录反应
        3.2.2 目的基因克隆
    3.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的生物信息学分析
    3.4 TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达水平分析
        3.4.1 材料的处理
        3.4.2 荧光引物的合成和RT-PCR反应
        3.4.3 荧光实时定量PCR的结果分析
    3.5 TaCBLs和TaCIPKs的酵母双杂交试验分析
        3.5.1 酵母双杂交所用载体和菌株
        3.5.2 试剂和培养基
        3.5.3 目的基因和酵母双杂交表达载体的构建
        3.5.4 酵母感受态细胞制备和重组质粒的转化及鉴定
        3.5.5 融合蛋白自激活活性的测定
        3.5.6 酵母双杂交及其蛋白相互作用的鉴定
4 结果与分析
    4.1 RNA及cDNA检测
    4.2 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的全长克隆
    4.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息学分析
        4.3.1 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的理化性质分析
        4.3.2 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的疏水性/亲水性预测与分析
        4.3.3 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的跨膜结构域预测
        4.3.4 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的同源性分析
        4.3.5 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白序列的功能结构域分析
        4.3.6 小麦TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的磷酸化位点分析
    4.4 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达分析
        4.4.1 融解曲线分析
        4.4.2 小麦TaCIPK5基因的表达分析
        4.4.3 小麦TaCIPK8基因的表达分析
    4.5 小麦TaCIPKs与TaCBLs蛋白的互作分析
        4.5.1 酵母双杂交表达载体的构建及鉴定
        4.5.2 重组质粒转化及鉴定
        4.5.3 融合蛋白毒性和自激活活性检测
        4.5.4 TaCBLs与TaCIPKs相互作用鉴定
5 结论与讨论
    5.1 小麦TaCIPK5和TaCIPK8基因的克隆
    5.2 TaCIPK5和TaCIPK8蛋白的生物信息学分析
    5.3 不同胁迫下TaCIPK5和TaCIPK8基因的表达分析
    5.4 酵母双杂交试验检测TaCBLs和TaCIPKs基因的相互作用
    5.5 全文结论
参考文献
ABSTRACT
英文缩略表



本文编号：3870661