大豆Gmsos1突变系的检测与耐盐性评价

发布时间：2024-04-13 03:27

　　大豆(Glycie max)是重要的经济作物,属于中度耐盐性植物。利用现代育种手段,培育高耐盐性大豆种质资源,充分利用盐碱地等边际土地种植大豆,以缓解大豆的进口依赖度的需求变得越来越迫切。盐渍化土壤对植物产生的危害主要是Na+的毒害作用,植物中的SOS1蛋白(salt overly sensitive 1,SOS1)是细胞膜上的Na+/H+逆转运蛋白,主要介导Na+外排或Na+区域化来减少Na+对细胞的危害。前期利用CRISPR/Cas9基因编辑技术已成功获得了大豆Na+/H+逆转运蛋白GmSOS1的突变体植株系。本研究,利用PCR、测序和CAPS分子标记技术,对已经获得的T3和T4代大豆突变体植株系进行检测,并根据其突变类型进行分类,进行了耐盐性评价及基因功能的初步分析。研究结果为探讨耐盐性差异与不同编辑位点之间的相关性,阐明大豆GmSOS1耐盐性调控机理,获得具有育种价值的耐盐性大豆新种质资源奠定理论与实践基础。本研究的主要结果如下:(1)前期利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,编辑大豆GmSOS1激活域和自抑制域之间的连接序列,获得了大豆Gmsos1突变系。根据多序列比对及生...

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【部分图文】：

图１－１植物细胞中ＳＯＳ途径示意图ｔ５］??注：１４－３－３：?１４－３－３?蛋白；ＧＩ：?（ＧＩＧＡＮＴＥＡ）?ＧＩＧＡＮＴＥＡ?蛋白；ＳＣａＢＰ?１／８：?（ｃａｌｃｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇ??ｐｒｏｔｅｉｎｌ／８）钙结合蛋白?１／８；?ＮＨＸ：?（Ｎａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）钠离子／氢质子交换蛋白，？?ＰＫＳ５／２４：?（Ｓ０Ｓ２－ｌｉｋｅ??

１．１植物中的ＳＯＳ途径??高盐环境下，为降低细胞内Ｎａ＋的大量积累，植物通过限制Ｎａ＋摄取、增加Ｎａ＋外??排和对细胞内Ｎａ＋的区隔等策略以降低细胞质中的Ｎａ＋浓度，维持相对较高的Ｋ＋／Ｎａ＋??比，进而保证植物的正常生命活动⑴。??在这些过程中起关键作用的是质膜Ｎａ＋／Ｈ＋逆....

图１－２拟南芥ＡｔＳＯＳｌ功能域及激活机制Ｍ２３】??注：ＡｔＳＯＳｌ包括Ｎ－端跨膜域（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｄｏｍａｉｎｓ，?ＴＭ，黄色）、与ＡｔＮＨＸ８同源的胞内??

ＳＯＳ１也成为目前己知的最长的Ｎａ＋／Ｈ＋逆转运蛋白，ＳＯＳ１蛋白Ｎ端的跨膜??区和Ｃ端位于细胞质中的长链尾巴共同构成了一个同源二聚体结构。ＳＯＳ１蛋白的跨膜??结构域与胞质结构域相互作用来抑制其转运活性（图１－２）?［２２，２３］。无盐胁迫时，ＡｔＳＯＳｌ??的Ｃ末端自抑制域与....

图1礴植物5051蛋白多序列比对

用拟南芥ＡｔＳＯＳｌ?（ＡＴ２Ｇ０１９８０）的信息通过ｐｈｙｔｏｚｏｍｅｌＯ同源比对获得??（Ｇｌｙｍａ．０８Ｇ０９２０００）基因序列信息。Ｓ０Ｓ１功能域和进化树分析显示，大豆Ｓ０Ｓ１蛋白??和其他物种中的２２个沿基因具有高度同源的Ｎａ＋／Ｈ＋交换域，因此可能与其他已知??物种的....

图１－５大豆遗传转化载体３５Ｓ：ｈＳｐＣａｓ９?－?ｐＧｍＵ６?－?ｓｇＲＮＡ构建示意图??Ａ：ＣａＭＶ３５Ｓ启Ｃａｓ９，?ｓＲＮＡＧｍＵ６，ＮＬＳ

接序列设计２个ｓｇＲＮＡ位点（ＳＧ１和ＳＧ２），并构建载体ｐＣＢＳＧ０４－ＧｍＵ６：ｓｇＲＮＡ－??ＣａＭＶ３５Ｓ：Ｃａｓ９，将重组载体转入农杆菌ＥＨＡ１９５后利用子叶节转入大豆ｗｉｌｌｉａｍｓ８２中??（图１－５）。从ＴＯ代开始在主茎第二片复叶完全展开时（Ｖ２期）进行草丁膦抗性....

本文编号：3952411