瘦素与脂联素在东北林蛙输卵管中的季节性表达

发布时间：2020-05-07 21:42

【摘要】：东北林蛙,是分布于我国东北地区的一种重要的两栖类经济动物,其在冬眠前期特异性膨大的输卵管晒干后可制成著名中药“林蛙油”,而其输卵管在冬眠前期特异性膨大的生理学现象的机理尚不清楚。冬眠前膨大的东北林蛙输卵管中富含脂质,为冬眠中的机体提供能量。近年来的研究发现,瘦素和脂联素,作为脂肪分泌的两种重要激素,具有调控摄食、能量代谢、生长发育和生殖等多种生物学功能。本项研究的目的是以野生雌性东北林蛙为研究对象,调查瘦素和脂联素在东北林蛙输卵管中表达位置及表达水平的季节性变化,评价瘦素和脂联素在东北林蛙输卵管季节变化中的调节作用。实验材料采样于我国东北吉林省吉林市,分别于4月繁殖期与10月冬眠前期采集野生雌性东北林蛙,获得输卵管组织,进行形态组织学观察,免疫组织化学,免疫印迹,ELISA与实时定量PCR实验。实验结果显示：(1)形态组织学结果显示东北林蛙输卵管的重量与周径大小从繁殖期至冬眠前期显著上升,东北林蛙输卵管的组织结构呈现显著的变化；输卵管的组织学结果显示冬眠前期输卵管的黏膜上皮细胞少纤毛,固有层管状腺体积大,腺细胞界限模糊,而繁殖期却与之相反,表现为黏膜上皮细胞多纤毛,固有层管状腺体积小,腺细胞界限清晰。(2)东北林蛙输卵管中PCNA与PPARy2的免疫组织化学显示两个时期输卵管均有表达；免疫印迹结果显示PPARy2在冬眠前期输卵管中的免疫活性显著高于繁殖期,而PCNA没有明显变化。(3)在繁殖期与冬眠前期的东北林蛙输卵管中,瘦素的免疫定位在林蛙输卵管的黏膜上皮细胞,而瘦素受体定位在固有层腺细胞；免疫印迹结果显示在冬眠前期输卵管中的瘦素与瘦素受体的免疫活性显著高于繁殖期；ELISA结果显示冬眠前期的输卵管总蛋白瘦素的含量高于繁殖期；瘦素受体的实时定量PCR结果也显示了瘦素受体mRNA的表达量相对于繁殖期,在冬眠前期有显著提升。脂联素与其受体在两个时期的输卵管均有阳性表达；免疫印迹实验显示了冬眠前期脂联素的免疫活性显著低于繁殖期。这些结果表明,东北林蛙输卵管在冬眠前特异性膨大可能是细胞增殖与脂类物质积累共同作用的过程,瘦素和脂联素呈负相关,协同在东北林蛙输卵管的季节性变化中起着重要的自分泌／旁分泌调节作用。
【图文】：

逡逑果如图３－３所示。ＰＣＮＡ和ＰＰＡＲｙ２在两个时期均有表达并定位于输卵管炥膜上皮细逡逑胞核和固有层的腺细胞核（图３－３ａ－ｄ）。冬眠前期的ＰＣＮＡ的免疫信号强度与繁殖期逡逑相似，而冬眠前期的ＰＰＡＲｙ２的免疫组化信号强度均要高于繁殖期的信号强度。用正逡逑常兔血清处理的阴性对照组切片则没有免疫阳性表达（图３－３邋ｅ，邋ｆ）。逡逑繁殖期逦冬眠前期逡逑ｒｒ－＾邋＇逦／逡逑W：分逡逑ｐ－瞧灥ｆｅ、耀逡逑——逦－逦Ｉ邋｜．逦１，，邋？－邋■邋：？逡逑＊邋？？逦＿■逦，，邋？邋Ｉ逦．逡逑ｔｇ＾逦‘逦ｒ、个逡逑，Ｕ邋Ｊ逡逑、‘－邋．逡逑５０邋ｐｏｉ逦５０邋＼ｋｍ逡逑ａ和ｂ．四月繁殖期（ａ）和十月冬眠前期（ｂ）的雌性东北林蛙输卵管中ＰＣＮＡ的免疫组织化学的定位表达。ｃ和ｄ．四逡逑月繁殖期（Ｃ）和Ｉ？月冬眠前期⑷的东北林魅输卵管中ＰＰＡＲｙ２的免疫组织化学的定位表达。ｅ和ｆ．正常兔血清处逡逑理的阴性对照组。标尺为５（Ｈｉｎｉ。左下角均为表达位点的局部放大图。ＥＣ为炥膜上皮细胞，ＴＧ为炥膜同有层管逡逑状腺

Ｐ－ａｃｔｉｎ蛋Ａ作为内参蛋Ａ在各月份输卵管组织中表达量一致。免疫印迹条带光密度分析量化结果图中，＊＊＊表示逡逑差界极显著（ｐ＜０．００１）。逡逑图３－６邋ｌｅｐｔｉｎ和ｌｅｐｔｉｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ在繁殖期和冬眠前期林蛙输卵管中的免疫印迹结杲逡逑ａ邋＆邋ｂ）邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｌｅｐｔｉｎ邋（ａ）邋ａｎｄ邋ｌｅｐｔｉｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ邋（ｂ）邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅｓ邋ｏｆ邋Ｒａｎａ邋ｄｙｂｏｗｓｋｉｉ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｔｈｅ邋ｂｒｅｅｄｉｎｇ逡逑ｐｅｒｉｏｄ邋ａｎｄ邋ｐｒｅ－ｈｉｂｅｍａｔｉｏｎ．邋Ｔｏｔａｌ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｗａｓ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ邋ｐｅｒｉｏｄ邋（ｌａｎｅ邋Ｂ）．邋Ｔｏｔａｌ逡逑ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｅ－ｈｉｂｅｍａｔｉｏｎ邋（ｌａｎｅ邋Ｐ）邋ａｎｄ邋ａｄｉｐｏｓｅ邋ｔｉｓｓｕｅ邋（ｌａｎｅ邋ＰＣ）邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋Ｒａｔ邋ｕｓｅｄ邋ｆｏｒ逡逑ｔｈｅ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ，，邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ａｎｔｉｂｏｄｙ邋ｒｅｃｌａｉｍｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｆｕｌｌ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋（ｌａｎｅ邋ＮＣ）邋ｗａｓ邋ｕｓｅｄ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ．邋Ｍｅａｎ邋ｖａｌｕｅｓ邋ｗｉｔｈｉｎ邋ｔｈｅ邋ｃｏｌｕｍｎｓ邋ｍａｒｋｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ａｓｔｅｒｉｓｋ邋ｗｅｒｅ邋ｕｓｅｄ邋ｔｏ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋（＊＊＊
【学位授予单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S966.35

【参考文献】

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本文编号：2653589