石斑鱼抗原递呈通路及其免疫相关分子在刺激隐核虫感染后表达谱分析
发布时间：2023-11-26 13:22
刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)是严重危害东南亚海水养殖鱼类的寄生虫病原。前期研究发现刺激隐核虫可以引起有效的皮肤粘膜及系统体液免疫应答,但该寄生虫感染后具体的免疫调控机理还不是十分清楚。本课题采用Real-time PCR检测了石斑鱼抗原递呈通路免疫相关重要分子的组织分布,随后测定了寄生虫感染后粘膜免疫及系统免疫组织中的基因表达模式,探究它们在鱼类抗寄生虫感染中的作用。本论文取得的主要研究结果如下:首次克隆了石斑鱼CTSS的全长序列(登录号KU179320),同源比对显示石斑鱼CTSS与其他脊椎动物同源性为56.01%-79.1%。系统进化树分析显示石斑鱼CTSS与鱼类同源蛋白亲缘关系更近。组织表达分析显示,CTSB和CTSL在健康石斑鱼的13个试验组织中广泛表达,但CTSB在脾脏、头肾以及鳃中表达量较高,CTSL在肌肉及皮肤中表达水平较高。CTSS在试验组织中呈现相对特异性表达,在头肾和脾脏中表达量较高。GILT表达量最高的组织是腮和头肾。MHC ⅡA主要在石斑鱼的胸腺、皮肤、肠和腮中检测到较高表达水平;而MHC ⅡB在皮肤中表达量最高,其次是腮、脾脏、头肾...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 绪论
1.1 斜带石斑鱼简介
1.1.1 分类及分布情况
1.1.2 形态特征
1.1.3 养殖情况
1.2 鱼类免疫系统
1.2.1 免疫器官及组织
1.2.2 免疫细胞
1.2.3 体液免疫因子
1.3 鱼类抗原递呈及其相关基因研究概况
1.3.1 组织蛋白酶
1.3.2 γ-干扰素诱导的溶酶体硫还原酶GILT
1.3.3 主要组织相容性复合体
1.4 刺激隐核虫及其免疫学研究
1.5 本研究的目的及意义
第二章 石斑鱼组织蛋白酶S克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 试验试剂
2.1.2 试验仪器及工具准备
2.1.3 实验鱼
2.2 实验方法
2.2.1 组织样品的采集
2.2.2 组织总RNA的提取
2.2.3 RNA反转录
2.2.4 CTSS全长克隆和序列分析
2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测
2.2.6 PCR产物的回收纯化
2.2.7 序列分析
2.3 结果与分析
2.3.1 RNA样品质量鉴定
2.3.2 cDNA质量鉴定
2.3.3 CTSS 全长克隆
2.3.4 蛋白比对
2.3.5 进化树
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 刺激隐核虫感染后石斑鱼MHC Ⅱ免疫相关分子表达谱分析
3.1 试验材料
3.1.1 试验试剂及主要仪器
3.1.2 试验石斑鱼
3.1.3 感染用刺激隐核虫
3.2 试验方法
3.2.1 刺激隐核虫感染
3.2.2 组织样品采集
3.2.3 RNA提取及cDNA合成
3.2.4 MHC Ⅱ免疫相关分子引物设计
3.2.5 Real-time PCR
3.2.6 数据分析
3.3 结果与分析
3.3.1 免疫相关分子的正常组织分布
3.3.2 感染后MHC Ⅱ相关信号通路分子表达谱
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 刺激隐核虫感染后石斑鱼MHC Ⅰ类分子表达谱分析
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 刺激隐核虫感染及组织样品的采集
4.2.2 石斑鱼组织总RNA提取
4.2.3 cDNA合成
4.2.4 引物设计
4.2.5 Real-time PCR
4.2.6 数据分析及信息学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 石斑鱼 β2m蛋白比对及进化分析
4.3.2 健康石斑鱼中MHC Ⅰα 和 β2m组织分布
4.3.3 刺激隐核虫免疫MHC Ⅰα 和 β2m基因表达谱
4.4 讨论
4.5 本章小结
结论与展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3867862
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 绪论
1.1 斜带石斑鱼简介
1.1.1 分类及分布情况
1.1.2 形态特征
1.1.3 养殖情况
1.2 鱼类免疫系统
1.2.1 免疫器官及组织
1.2.2 免疫细胞
1.2.3 体液免疫因子
1.3 鱼类抗原递呈及其相关基因研究概况
1.3.1 组织蛋白酶
1.3.2 γ-干扰素诱导的溶酶体硫还原酶GILT
1.3.3 主要组织相容性复合体
1.4 刺激隐核虫及其免疫学研究
1.5 本研究的目的及意义
第二章 石斑鱼组织蛋白酶S克隆及序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 试验试剂
2.1.2 试验仪器及工具准备
2.1.3 实验鱼
2.2 实验方法
2.2.1 组织样品的采集
2.2.2 组织总RNA的提取
2.2.3 RNA反转录
2.2.4 CTSS全长克隆和序列分析
2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测
2.2.6 PCR产物的回收纯化
2.2.7 序列分析
2.3 结果与分析
2.3.1 RNA样品质量鉴定
2.3.2 cDNA质量鉴定
2.3.3 CTSS 全长克隆
2.3.4 蛋白比对
2.3.5 进化树
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 刺激隐核虫感染后石斑鱼MHC Ⅱ免疫相关分子表达谱分析
3.1 试验材料
3.1.1 试验试剂及主要仪器
3.1.2 试验石斑鱼
3.1.3 感染用刺激隐核虫
3.2 试验方法
3.2.1 刺激隐核虫感染
3.2.2 组织样品采集
3.2.3 RNA提取及cDNA合成
3.2.4 MHC Ⅱ免疫相关分子引物设计
3.2.5 Real-time PCR
3.2.6 数据分析
3.3 结果与分析
3.3.1 免疫相关分子的正常组织分布
3.3.2 感染后MHC Ⅱ相关信号通路分子表达谱
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 刺激隐核虫感染后石斑鱼MHC Ⅰ类分子表达谱分析
4.1 试验材料
4.2 试验方法
4.2.1 刺激隐核虫感染及组织样品的采集
4.2.2 石斑鱼组织总RNA提取
4.2.3 cDNA合成
4.2.4 引物设计
4.2.5 Real-time PCR
4.2.6 数据分析及信息学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 石斑鱼 β2m蛋白比对及进化分析
4.3.2 健康石斑鱼中MHC Ⅰα 和 β2m组织分布
4.3.3 刺激隐核虫免疫MHC Ⅰα 和 β2m基因表达谱
4.4 讨论
4.5 本章小结
结论与展望
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
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本文编号：3867862
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