星斑川鲽（Platichthys stellatus）小电导钙激活型钾通道SKCa2基因的克隆及免疫功能研究
发布时间：2024-02-01 13:15
钾离子通道是细胞膜上一类仅允许钾离子出入细胞的跨膜蛋白,通过通道的启闭控制着离子的跨膜流动,启动胞内各种重要的信息传导系统,参与多种细胞功能的调节。SKCa2属于小电导钙激活型钾离子通道(KCa)家族,具有K+选择性、Ca2+高敏感性和电压不依赖性等特性,是淋巴细胞上一种重要的钾离子通道。当淋巴细胞受到刺激时,细胞表面的钾通道可以通过调节细胞内的离子浓度以及膜电位,在淋巴细胞的激活、增殖、分化和机体整个免疫应答起着重要的调节作用。 星斑川鲽(Platichthys stellatus)属海洋经济鱼类中的名贵珍稀物种,具有极高的商业价值。养殖病害频发往往会造成巨大的经济损失,直接制约着海水养殖产业的产量和健康发展。鉴于钾离子通道在机体免疫应答机制中所起的关键作用,深入了解鱼类非特异性免疫应答及调控机制,对于丰富鱼类免疫学的基本内容与基础理论,为海洋鱼类健康养殖提供理论依据和技术指导都有着重要的科学价值与现实意义。目前,离子通道蛋白对免疫系统功能调控的研究已成为国内外专家学者研究的热点。 本文以经济鱼类星斑川鲽的脑cDNA为模板,利用RT-PCR和RACE技术获得了星斑川鲽SKCa2基因的...
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 前言
1.1 离子通道概述
1.2 钾离子通道概述
1.2.1 钾离子通道的结构
1.2.2 钾离子通道的分类
1.3 钾离子通道与鱼类免疫机制研究
1.3.1 鱼类的免疫机制概述
1.3.2 钾离子通道在鱼体免疫中的作用
1.4 小电导钙激活型钾离子通道研究进展
1.5 本研究的目的及意义
第二章 星斑川鲽SKCa2基因的克隆与序列的生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂和仪器
2.1.3 SKCa2基因PCR引物设计
2.1.4 星斑川鲽脑总RNA提取
2.1.5 cDNA第一链的合成
2.1.6 PCR扩增星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列
2.1.7 PCR产物纯化
2.1.8 目的片段与T载体连接并转化感受态细胞
2.1.9 挑取单菌落进行阳性检测
2.1.10 测序结果验证
2.1.11 星斑川鲽SKCa2基因的5’RACE
2.1.12 星斑川鲽SKCa2基因的3’RACE
2.1.13 星斑川鲽SKCa2基因的测序结果拼接
2.1.14 星斑川鲽SKCa2基因序列的生物信息学分析
2.2 实验结果
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列扩增
2.2.3 星斑川鲽SKCa2基因的5'-RACE和3'-RACE
2.2.4 拼接获取星斑川鲽SKCa2的cDNA全长
2.2.5 星斑川鲽SKCa2基因的生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 星斑川鲽SKCa2通道在LPS刺激下的表达模式
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂和仪器
3.1.3 RT-PCR引物设计
3.1.4 各组织总RNA提取及cDNA合成
3.1.5 cDNA质量检测
3.1.6 星斑川鲽SKCa2在不同组织中的表达
3.1.7 星斑川鲽SKCa2在LPS刺激不同时间后各组织表达模式的变化
3.1.8 实验数据处理
3.2 实验结果
3.2.1 各组织cDNA的质量及RT-PCR引物特异性
3.2.2 SKCa2 mRNA在不同组织的相对表达量
3.2.3 SKCa2 mRNA在LPS刺激不同时间后各组织中的相对表达量变化
3.3 讨论
第四章 星斑川鲽SKCa2在淋巴细胞中的免疫应答机制
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂和仪器
4.1.3 星斑川鲽外周血淋巴细胞的制备
4.1.4 淋巴细胞计数
4.1.5 Apamin对淋巴细胞增殖的影响
4.1.6 星斑川鲽淋巴细胞增殖测定
4.1.7 星斑川鲽淋巴细胞呼吸爆发活性的测定
4.2 实验结果
4.2.1 淋巴细胞的分离与计数
4.2.2 Apamin对淋巴细胞增殖的影响
4.2.3 淋巴细胞增殖测定
4.2.4 淋巴细胞呼吸爆发活性测定
4.3 讨论
第五章 总结与展望
5.1 实验总结
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3892177
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
缩略词
第一章 前言
1.1 离子通道概述
1.2 钾离子通道概述
1.2.1 钾离子通道的结构
1.2.2 钾离子通道的分类
1.3 钾离子通道与鱼类免疫机制研究
1.3.1 鱼类的免疫机制概述
1.3.2 钾离子通道在鱼体免疫中的作用
1.4 小电导钙激活型钾离子通道研究进展
1.5 本研究的目的及意义
第二章 星斑川鲽SKCa2基因的克隆与序列的生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂和仪器
2.1.3 SKCa2基因PCR引物设计
2.1.4 星斑川鲽脑总RNA提取
2.1.5 cDNA第一链的合成
2.1.6 PCR扩增星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列
2.1.7 PCR产物纯化
2.1.8 目的片段与T载体连接并转化感受态细胞
2.1.9 挑取单菌落进行阳性检测
2.1.10 测序结果验证
2.1.11 星斑川鲽SKCa2基因的5’RACE
2.1.12 星斑川鲽SKCa2基因的3’RACE
2.1.13 星斑川鲽SKCa2基因的测序结果拼接
2.1.14 星斑川鲽SKCa2基因序列的生物信息学分析
2.2 实验结果
2.2.1 总RNA的提取
2.2.2 星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列扩增
2.2.3 星斑川鲽SKCa2基因的5'-RACE和3'-RACE
2.2.4 拼接获取星斑川鲽SKCa2的cDNA全长
2.2.5 星斑川鲽SKCa2基因的生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 星斑川鲽SKCa2通道在LPS刺激下的表达模式
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂和仪器
3.1.3 RT-PCR引物设计
3.1.4 各组织总RNA提取及cDNA合成
3.1.5 cDNA质量检测
3.1.6 星斑川鲽SKCa2在不同组织中的表达
3.1.7 星斑川鲽SKCa2在LPS刺激不同时间后各组织表达模式的变化
3.1.8 实验数据处理
3.2 实验结果
3.2.1 各组织cDNA的质量及RT-PCR引物特异性
3.2.2 SKCa2 mRNA在不同组织的相对表达量
3.2.3 SKCa2 mRNA在LPS刺激不同时间后各组织中的相对表达量变化
3.3 讨论
第四章 星斑川鲽SKCa2在淋巴细胞中的免疫应答机制
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂和仪器
4.1.3 星斑川鲽外周血淋巴细胞的制备
4.1.4 淋巴细胞计数
4.1.5 Apamin对淋巴细胞增殖的影响
4.1.6 星斑川鲽淋巴细胞增殖测定
4.1.7 星斑川鲽淋巴细胞呼吸爆发活性的测定
4.2 实验结果
4.2.1 淋巴细胞的分离与计数
4.2.2 Apamin对淋巴细胞增殖的影响
4.2.3 淋巴细胞增殖测定
4.2.4 淋巴细胞呼吸爆发活性测定
4.3 讨论
第五章 总结与展望
5.1 实验总结
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3892177
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3892177.html