创伤弧菌与嗜水气单胞菌二联外膜蛋白基因表达产物的免疫原性研究

发布时间：2024-04-27 04:15

　　鳗鲡是我国重要的经济养殖鱼类,但大规模集约化的养殖方式使得鳗鲡病害发生日益频繁,其中细菌性疾病是造成养殖鳗鲡重大损失的主要病原菌。细菌性疾病种类繁多,因而只针对单一菌种研制的鳗鲡亚单位疫苗常存在保护效率偏低、有效保护范围有限等问题,难以在水产养殖实践中推广。在本课题组已有的研究基础上,此次试验选取病原性创伤弧菌和嗜水气单胞菌作为代表菌株,通过基因提取试剂盒提取细菌基因组DNA,参考GenBank数据库中已提交的创伤弧菌和气单胞菌外膜蛋白基因序列设计引物,PCR克隆获得病原性创伤弧菌OmpU和嗜水气单胞菌Ⅱ型孔蛋白的基因全长序列。经序列分析后选取外膜蛋白基因所表达的膜外多肽基因序列,通过融合PCR连接两个外膜蛋白基因片段、构建表达载体(pGEX-2T-His-Vibrio-Aero)并进行高效表达;表达产物经纯化后免疫美洲鳗鲡,通过对溶菌酶含量、全血细胞刺激指数、血清抗体效价以及攻毒感染后免疫保护率的测定研究其免疫原性。研究方法与获得的主要结果如下:1.据GeneBank数据库已提交的创伤弧菌和嗜水气单胞菌全长序列中外膜蛋白基因序列左右两端设计引物,继而利用已提取的基因组DNA模板进行创...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.3琼脂糖电泳结果

创伤弧菌与嗜水气单胞菌二联外膜蛋白基因弧菌和嗜水气单胞菌外膜蛋白基因的体系下扩增病原性创伤弧菌外膜蛋白基因（的琼脂糖电泳结果显示，B82和B11都得到了的片段分子量在1200bp左右，与预期目的了序列分析并成功测序。创伤弧菌外膜蛋白基开放阅读框的大小分别为1023....

图2.4SOPMA法预测ompU基因编码的蛋白质二级结构

集美大学硕士学位论文创伤弧菌与嗜水气单胞菌二联外膜蛋白基因表达产物的免疫原性研个苯丙氨酸F，16个缬氨酸V）和159个极性中性氨基酸（22个天冬酰胺N，10个谷酰胺Q，19个丝氨酸S，28个苏氨酸T，28个酪氨酸Y，44个甘氨酸G，8个蛋氨....

图2.5SOPMA法预测Ⅱ型孔蛋白基因编码的蛋白质二级结构

集美大学硕士学位论文创伤弧菌与嗜水气单胞菌二联外膜蛋白基因表达产物的免疫原性研究42个甘氨酸G，4个蛋氨酸M）；3个脯氨酸P，1个任意氨基酸X。利用SOPMA程序预测的蛋白质二级结构。结果显示，此外膜蛋白可形成螺旋（Helix片层（Sheet）、转角（Tur....

图2.8Ⅱ型孔蛋白(B11)的亲水性分析结果

其在蛋白质上氨基酸顺序分别位于25-33、34-41、42-50、51-59、63-70、82-92、95-17-113、114-122、147-154、167-182、183-195、209-220、247-253、269-278、279-287、293-298、306-7-....

本文编号：3965340