Junctophilin2 MORN结构域对心肌小电导钙激活钾通道膜转运的调控
发布时间：2021-11-15 03:14
小电导钙激活钾通道（small conductance Ca2+activated K+channels,KCa2,SK）属于非电压依赖性的钙激活钾通道家族,主要分布于神经系统和心血管系统,对Ca2+的敏感性远高于大电导钙激活钾通道（big conductance Ca2+activated K+channels,BK）,可至亚微摩尔级。Ca2+通过与SK通道羧基端钙调蛋白（calmodulin,Ca M）结合激活通道,K+外流从而使细胞内钙离子稳态的变化转换成细胞膜电位变化。SK通道可分为三个亚型,SK1、SK2及SK3,其中SK2通道主要表达于心房,参与心肌细胞动作电位复极化形成,在生理和病理状态下起关键作用。敲除小鼠SK2通道可延长动作电位复极化的时程,房颤的易感性增加;过表达SK3通道可使动作电位复极化缩短,亦增加房颤发生。由此提示,SK通道可作为治疗房颤等心血管疾病的靶点,但其分子调控机制,目前所知甚少。Junctophilins（JPs）在哺乳动物可兴奋细胞中可维持内质网/肌质网（endoplasmic reticulum/sarcoplasmic reticulum,ER...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组JP2片段质粒双酶切鉴定图
第一部分：JP2蛋白与SK2通道相互作用区域的验证18的目的基因片段，由此可证实重组质粒构建成功。采用双向测序的方法鉴定构建的重组质粒pIRES2-EGFP-SK2-N、pIRES2-EGFP-SK2-M和pIRES2-EGFP-SK2-C，测序结果与GenBank中的小鼠SK2基因序列同源性比对分析，结果一致，表明重组质粒插入目的片段正确。图1.2重组SK2片段质粒双酶切鉴定图。A：pIRES2-EGFP-SK2-N；B：pIRES2-EGFP-SK2-M；C：pIRES2-EGFP-SK2-C。3.3JP2蛋白与SK2通道有相互作用在大鼠心肌组织和H9c2细胞中分别进行免疫共沉淀实验，结果证实JP2蛋白与SK2通道均可形成免疫沉淀复合物。如图1.3A和图1.3B所示，用抗JP2抗体检测到≈97kD条带，与JP2的分子量相符（左图）；相反，用抗SK2抗体检测到≈60kD的条带，刚好是SK2的分子量大小（右图），表明在大鼠心脏和H9c2细胞中SK2和JP2之间可能存在相互作用。图1.3SK2通道与JP2蛋白的相互作用。
第一部分：JP2蛋白与SK2通道相互作用区域的验证18的目的基因片段，由此可证实重组质粒构建成功。采用双向测序的方法鉴定构建的重组质粒pIRES2-EGFP-SK2-N、pIRES2-EGFP-SK2-M和pIRES2-EGFP-SK2-C，测序结果与GenBank中的小鼠SK2基因序列同源性比对分析，结果一致，表明重组质粒插入目的片段正确。图1.2重组SK2片段质粒双酶切鉴定图。A：pIRES2-EGFP-SK2-N；B：pIRES2-EGFP-SK2-M；C：pIRES2-EGFP-SK2-C。3.3JP2蛋白与SK2通道有相互作用在大鼠心肌组织和H9c2细胞中分别进行免疫共沉淀实验，结果证实JP2蛋白与SK2通道均可形成免疫沉淀复合物。如图1.3A和图1.3B所示，用抗JP2抗体检测到≈97kD条带，与JP2的分子量相符（左图）；相反，用抗SK2抗体检测到≈60kD的条带，刚好是SK2的分子量大小（右图），表明在大鼠心脏和H9c2细胞中SK2和JP2之间可能存在相互作用。图1.3SK2通道与JP2蛋白的相互作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Synaptobrevin-2 facilitates the trafficking and function of atrial SK2 channel[J]. Tao Li,Xuehui Fan,Yiyan Yu,Linlin Chen,Wenjun Huang,Yan Yang,Jimin Cao,Xiaorong Zeng,Xiaoqiu Tan. Science China（Life Sciences）. 2018(05)
本文编号：3495915
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
重组JP2片段质粒双酶切鉴定图
第一部分：JP2蛋白与SK2通道相互作用区域的验证18的目的基因片段，由此可证实重组质粒构建成功。采用双向测序的方法鉴定构建的重组质粒pIRES2-EGFP-SK2-N、pIRES2-EGFP-SK2-M和pIRES2-EGFP-SK2-C，测序结果与GenBank中的小鼠SK2基因序列同源性比对分析，结果一致，表明重组质粒插入目的片段正确。图1.2重组SK2片段质粒双酶切鉴定图。A：pIRES2-EGFP-SK2-N；B：pIRES2-EGFP-SK2-M；C：pIRES2-EGFP-SK2-C。3.3JP2蛋白与SK2通道有相互作用在大鼠心肌组织和H9c2细胞中分别进行免疫共沉淀实验，结果证实JP2蛋白与SK2通道均可形成免疫沉淀复合物。如图1.3A和图1.3B所示，用抗JP2抗体检测到≈97kD条带，与JP2的分子量相符（左图）；相反，用抗SK2抗体检测到≈60kD的条带，刚好是SK2的分子量大小（右图），表明在大鼠心脏和H9c2细胞中SK2和JP2之间可能存在相互作用。图1.3SK2通道与JP2蛋白的相互作用。
第一部分：JP2蛋白与SK2通道相互作用区域的验证18的目的基因片段，由此可证实重组质粒构建成功。采用双向测序的方法鉴定构建的重组质粒pIRES2-EGFP-SK2-N、pIRES2-EGFP-SK2-M和pIRES2-EGFP-SK2-C，测序结果与GenBank中的小鼠SK2基因序列同源性比对分析，结果一致，表明重组质粒插入目的片段正确。图1.2重组SK2片段质粒双酶切鉴定图。A：pIRES2-EGFP-SK2-N；B：pIRES2-EGFP-SK2-M；C：pIRES2-EGFP-SK2-C。3.3JP2蛋白与SK2通道有相互作用在大鼠心肌组织和H9c2细胞中分别进行免疫共沉淀实验，结果证实JP2蛋白与SK2通道均可形成免疫沉淀复合物。如图1.3A和图1.3B所示，用抗JP2抗体检测到≈97kD条带，与JP2的分子量相符（左图）；相反，用抗SK2抗体检测到≈60kD的条带，刚好是SK2的分子量大小（右图），表明在大鼠心脏和H9c2细胞中SK2和JP2之间可能存在相互作用。图1.3SK2通道与JP2蛋白的相互作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Synaptobrevin-2 facilitates the trafficking and function of atrial SK2 channel[J]. Tao Li,Xuehui Fan,Yiyan Yu,Linlin Chen,Wenjun Huang,Yan Yang,Jimin Cao,Xiaorong Zeng,Xiaoqiu Tan. Science China（Life Sciences）. 2018(05)
本文编号：3495915
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3495915.html
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