敲除里氏木霉hkmt基因可增强纤维素酶的酶活性和表达水平

发布时间：2021-11-21 00:16

　　表观遗传是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和miRNA调控等。在组蛋白甲基化修饰中,主要是组蛋白赖氨酸甲基转移酶（histone lysine methyltransferase,HKMT）参与调控。有文献报道,HKMT蛋白的催化核心为SET结构域,它具有促进或抑制基因表达的作用。在里氏木霉（Trichoderma reesei）中,HKMT对纤维素酶基因的表达调控的机制尚不明确。本文阐述了以里氏木霉为研究对象,利用Split-Maker技术构建了组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因敲除表达盒,并转化了里氏木霉T.reesei QM9414。经PCR及Southern印迹验证正确后,显微镜观察到T.reeseiΔhkmt菌株菌丝较长,分支较多。检测到突变体菌株连续7d滤纸酶活（filter paper enzyme activity,AFP）和羧甲基纤维素钠酶活（carboxymethyl cellulose sodium enzyme activity,CMCA）。结果分别比野生型菌株高出5.00 IU·mL^-1、15.00 IU·mL

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2020,36(02)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 培养基
        1.1.3 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 组蛋白赖氨酸甲基转移酶(hkmt)基因干扰片段的设计与合成
        1.2.2 敲除表达盒的构建
        1.2.3 T.reesei QM9414原生质体的转化
        1.2.4 基因组DNA提取及突变体T.reesei Δhkmt转化子的PCR验证
        1.2.5 Southern印迹验证突变体
        1.2.6 RNA提取
        1.2.7 RNA反转录和荧光定量PCR
        1.2.8 酶活测定
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因敲除盒的构建
    2.2 突变体T.reesei Δhkmt 的PCR鉴定
    2.3 突变体T. reesei Δhkmt转化子的Southern 印迹验证
    2.4 T. reesei QM9414和T. reesei Δhkmt菌株表型差异分析
    2.5 敲除赖氨酸甲基转移酶的突变体中FPA和CMCA的酶活性明显提高
    2.6 敲除赖氨酸甲基转移酶的突变体中cbh1、egl1和xyr1,转录水平明显增强
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]多靶向沉默里氏木霉碳代谢阻遏物对纤维素酶活性和表达的调控研究[J]. 邓嘉雯,高云雨,刘旭坤,张珂珂,钟路遥,田生礼.  微生物学报. 2019(04)
[2]里氏木霉组成型表达siRNA干扰cre1基因对纤维素酶表达的调控作用[J]. 高云雨,钟路遥,董冠园,佘伟怡,周娇娇,刘思远,田生礼.  微生物学杂志. 2018(01)
[3]5-氮杂-2-脱氧胞苷对里氏木霉产纤维素酶的影响[J]. 周娇娇,佘炜怡,王浩入,谢宁,田生礼.  深圳大学学报(理工版). 2017(02)



本文编号：3508374