Cpf1核酸酶的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定

发布时间：2024-06-23 11:01

　　将Cpf1核酸酶N端166个氨基酸的DNA编码序列克隆至pET-28a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行重组表达,对诱导其表达的IPTG浓度和诱导时间开展条件优化。利用6×His纯化标签得到的重组蛋白作为抗原进行动物免疫,间接ELISA方法测定免疫后抗血清效价达到128 000,并经Protein A纯化后得到抗体,Western Blot分析抗体的特异性,结果显示可以特异性识别大肠杆菌中表达的Cpf1~((1-166))和Cpf1,为Cpf1在生物体中的检测提供工具,且将为推动CRISPR/Cpf1系统在生物体中的应用奠定良好的实验基础。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株、质粒和动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 实验动物
    1.2 方法
        1.2.1 原核表达载体的构建
        1.2.2 Cpf1(1-166)在大肠杆菌细胞内的条件改良
        1.2.3 融合蛋白6×His-Cpf1(1-166)的纯化
        1.2.4 多克隆抗体的制备
        1.2.5 ELISA法测定效价
        1.2.6 抗血清的纯化
        1.2.7 SDS-PAGE和Western Blot分析
2 结果与分析
    2.1 原核表达载体的构建及鉴定
    2.2 Cpf1(1-166)在大肠杆菌细胞内表达的条件改良
    2.3 重组蛋白的纯化及Western Blot分析
    2.4 ELISA测定抗血清效价
    2.5 多克隆抗体的特异性检测
3 讨论与结论



本文编号：3995367