新型适冷纤维素酶的酶学鉴定及功能位点研究

发布时间：2021-12-19 03:54

　　随着资源短缺问题的加剧,人们开始将目光放在可再生资源上,作为世界上产量极丰富的纤维素资源,其可通过纤维素酶的分解产生葡萄糖等,为进一步的加工提供原料。本实验在新的纤维素酶基因克隆、表达、酶学性质和功能位点上做了系统的研究,主要研究内容如下:1.从低温气候的西藏地区采样获得了两种可以分解纤维素的菌株Microbacterium kitamiense和Zhihengliuella halotolerans,并成功克隆了四个新型纤维素酶基因,Mkcel5A、MkcelB、ZhcelA和ZhcelB,通过刚果红染色法验证这四个基因编码的蛋白有纤维素酶活力,进一步的表达发现其中三个蛋白为包涵体,另一个表达量较低。2.对四个基因中的一种纤维素酶基因MkCel5A进行深入研究,结果显示其基因的开放阅读框大小为1449 bp,编码了一个大小为482个残基的多肽,分子量为51.38 kDa。序列分析表明MkCel5A蛋白属于糖基水解酶家族5（GH5）,并且与内切葡聚糖酶同源性很高。对MkCel5A蛋白经过复性和纯化处理后发现,其最适催化温度为25℃,最适催化pH为7.0,金属离子Rb⁺

【文章来源】：安徽师范大学安徽省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

农业废弃物中植物细胞壁的组成

由几百至几万个葡萄糖小分子通过β-1,4 糖苷键形成密集的结构，其结构图如图1-2，化学分子式为（C6H10O5）n，常温及高温下热稳定性都十分好，正常

Tilbeurh等人发现来自里氏木霉 Trichoderma reesei的外水解酶（CBH I）被木瓜蛋白酶水解后的产物有两种，差但能水解可溶性纤维素的较大片段，另一种是无法水素的较小片段[18]。在这之后对纤维素酶的深入研究发现部分都由三个结构组成，纤维素结合域（CelluloseD）和催化结构域（Catalytic domain, CD），CBD 和 Cer）连接。整个纤维素酶的形状如同一个拖着尾部的球部，中间是高度糖基化、柔韧性较好、富含羟基类氨基桥，尾部是折叠好的 CBD，其中纤维素酶的催化和结合其形状如图 1-3 所示[21]。一般情况下来源于细菌的纤维间有一个 135 度的夹角，而真菌类纤维素酶的两个结构[22]。


本文编号：3543719