蜱传脑炎病毒（TBEV）报告病毒载体的构建及活性检测
发布时间：2022-01-03 16:57
蜱传脑炎病毒（TBEV）是一种重要的蜱传病毒,与黄热病病毒（YFV）、登革病毒（DENV）、寨卡病毒（ZIKV）等同属黄病毒科黄病毒属,是正链RNA病毒。感染TBEV可能会引发脑膜炎,脑炎和脑膜脑炎,严重可导致终身神经系统并发症,这些症状统称为蜱传脑炎（TBE）。自1937年前苏联科学家在苏联上报该病以后,陆续在欧洲、西伯利亚、俄罗斯、中国北部和日本等至少34个国家都发现了这种病。TBE每年的发病率仍在上升,而且相比其他蚊媒传播的黄病毒,对TBEV等蜱传病毒的了解很少。因此研究TBEV与宿主细胞的相互作用,分子生物学等特性仍然十分有必要。报告病毒是监测病毒、研究病毒毒力、抗病毒药物筛选中经常用到的有力工具,然而目前还未见有关TBEV报告病毒的相关报道。本文主要进行了以下两方面的工作:TBEV Nluc报告病毒载体的构建及活性检测;TBEV miRFP670nano报告病毒的构建及活性检测。一、TBEV Nluc报告病毒载体的构建及活性检测Nluc基因是荧光素酶领域新开发出的一个基因,该基因有分子量小、灵敏度高等特点。构建含有Nluc报告基因的TBEV报告病毒,报告基因的插入位点在TBE...
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图0-1TBE在世界的分布[5]
图0-2TBE在中国的分布
引言7和膜的非传染性颗粒的产生来阻止TBEV的组装[84]。一旦NCs组装好，它们通过进入内质网腔获得脂质膜。此时的病毒粒子尚未成熟，这一过程也可以在没有NC的情况下发生，因为产生NC缺陷的亚病毒颗粒是黄病毒感染的正常部分[85]。在未成熟的粒子通过出芽进入内质网之后，它们通过高尔基体和跨高尔基体网络（TGN），在TGN中，粒子暴露在低pH下，导致（prM-E）构象发生重大变化。随着三聚体的解离，尖尖的未成熟颗粒转变为光滑的“预成熟”颗粒，prM-E二聚体进一步二聚，形成与成熟颗粒相似的结构。唯一的区别是pr肽的存在，它仍然位于融合肽的顶部[86-88]。这种重排开始于一个或多个独立的成核中心，而不是同时发生在整个粒子上，否则会导致空间碰撞[89]。在构象改变后，通过宿主弗林蛋白酶从prM中切割pr肽来完成成熟。在未成熟颗粒中，prM-弗林蛋白酶断裂位点不可接近。在pH介导的构象变化后，它暴露在外，pr肽被裂解。然而，在TGN的酸性pH下，它仍然与E-M-M-E杂四聚体结合。因此，它仍然掩盖融合环，防止与TGN膜过早融合。pr肽只有在病毒通过胞内吞作用离开细胞到达中性胞外环境后才能与病毒分离。Pr肽解离引发病毒融合，从而使其具有传染性[86-87,90-91]。黄病毒的成熟过程并不总是完整的，这导致感染细胞产生未成熟和部分成熟的颗粒。完全未成熟的颗粒不具传染性，因为它们无法融合，但部分成熟的颗粒可感染新细胞[92-93]。图0-3TBEV粒子模式图
【参考文献】：
期刊论文
[1]Tick-Borne Viruses[J]. Junming Shi,Zhihong Hu,Fei Deng,Shu Shen. Virologica Sinica. 2018(01)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]蜱传脑炎病毒传播的生态链[J]. 杨正时. 中国微生态学杂志. 2012(01)
[4]黑龙江省森林脑炎疫情趋势分析[J]. 张殿鸿,张志学,王耀明,王德焕. 疾病监测. 2000(02)
本文编号：3566633
【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图0-1TBE在世界的分布[5]
图0-2TBE在中国的分布
引言7和膜的非传染性颗粒的产生来阻止TBEV的组装[84]。一旦NCs组装好，它们通过进入内质网腔获得脂质膜。此时的病毒粒子尚未成熟，这一过程也可以在没有NC的情况下发生，因为产生NC缺陷的亚病毒颗粒是黄病毒感染的正常部分[85]。在未成熟的粒子通过出芽进入内质网之后，它们通过高尔基体和跨高尔基体网络（TGN），在TGN中，粒子暴露在低pH下，导致（prM-E）构象发生重大变化。随着三聚体的解离，尖尖的未成熟颗粒转变为光滑的“预成熟”颗粒，prM-E二聚体进一步二聚，形成与成熟颗粒相似的结构。唯一的区别是pr肽的存在，它仍然位于融合肽的顶部[86-88]。这种重排开始于一个或多个独立的成核中心，而不是同时发生在整个粒子上，否则会导致空间碰撞[89]。在构象改变后，通过宿主弗林蛋白酶从prM中切割pr肽来完成成熟。在未成熟颗粒中，prM-弗林蛋白酶断裂位点不可接近。在pH介导的构象变化后，它暴露在外，pr肽被裂解。然而，在TGN的酸性pH下，它仍然与E-M-M-E杂四聚体结合。因此，它仍然掩盖融合环，防止与TGN膜过早融合。pr肽只有在病毒通过胞内吞作用离开细胞到达中性胞外环境后才能与病毒分离。Pr肽解离引发病毒融合，从而使其具有传染性[86-87,90-91]。黄病毒的成熟过程并不总是完整的，这导致感染细胞产生未成熟和部分成熟的颗粒。完全未成熟的颗粒不具传染性，因为它们无法融合，但部分成熟的颗粒可感染新细胞[92-93]。图0-3TBEV粒子模式图
【参考文献】：
期刊论文
[1]Tick-Borne Viruses[J]. Junming Shi,Zhihong Hu,Fei Deng,Shu Shen. Virologica Sinica. 2018(01)
[2]Tick-borne encephalitis: A review of epidemiology, clinical characteristics, and management[J]. Petra Bogovic,Franc Strle. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]蜱传脑炎病毒传播的生态链[J]. 杨正时. 中国微生态学杂志. 2012(01)
[4]黑龙江省森林脑炎疫情趋势分析[J]. 张殿鸿,张志学,王耀明,王德焕. 疾病监测. 2000(02)
本文编号：3566633
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