黏着斑激酶在诱导小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化过程中的作用及机制
发布时间：2022-01-04 04:09
研究背景及目的:间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）属于多能干细胞,具有良好的增殖能力及多向分化潜能,其在特定的诱导条件下,可向多种细胞定向分化,继而分化成骨、软骨、肌肉、脂肪等组织。在再生医学领域,间充质干细胞被作为理想的种子细胞用于骨组织工程,主要应用于骨质疏松、难愈合性骨折等疾病的治疗。永生化小鼠胚胎成纤维细胞（immortalized mouse embryonic fibroblasts,iMEF）具备间充质干细胞相关生物特性,具有自我更新和多向分化潜能,同时可以通过质粒转染或基因改造来表达异位基因,是分析基因功能的合适的细胞模型,多被用作为骨髓间充质干细胞的代生干细胞模型,以研究中胚层细胞的分化机制。黏着斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）是胞质内非受体蛋白酪氨酸激酶,集中在粘着斑附近,通过整合来自细胞外压力、营养、细胞黏着等多方面的信号,参与调控多条信号转导通路,调节细胞迁移和血管生成,尤其在肿瘤细胞的进展和转移中起重要作用。此外,目前已证实的参与影响成骨细胞成骨分化过程的相关物理因素如磁场、超声波等,化学因子如一...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1Westernblot分别检测iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-细胞FAK蛋白的表达
黏着斑激酶在诱导小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化过程中的作用及机制142.2.5统计学分析应用SPSS19.0软件进行数据统计学分析，数据呈正态分布，计量资料采用X±S表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验，检验水准α=0.05。2.3结果2.3.1iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞的鉴定取相同规格培养皿中iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞，在RIPA裂解液下裂解，经BCA蛋白定量后，进行Westernblot实验。结果如图2.3.1所示：iMEFFAK+/+细胞株的FAK蛋白表达阳性，iMEFFAK-/-细胞株FAK蛋白表达阴性。通过该实验证实黏着斑激酶存在并表达于小鼠胚胎成纤维细胞，同时也对细胞株进行了有效的鉴别，以供后续实验进行。图2.3.1Westernblot分别检测iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-细胞FAK蛋白的表达Figure2.3.1TheexpressionofFAKproteininiMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-cellswasdetectedbyWesternblot2.3.2iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态差异倒置显微镜下观察iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态的差异，结果如图2.3.2所示：iMEFFAK+/+细胞为贴壁生长的多突的纺锤形或星形的扁平细胞，多呈多角形，呈集落样生长。iMEFFAK-/-细胞较iMEFFAK+/+体积明显缩小且多呈梭形。图2.3.2光学显微镜下iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态改变（×200）Figure2.3.2MorphologicalchangesbetweeniMEFFAK+/+andiMEFFAK-/-cellsunderlightmicroscope（×200）
江苏大学硕士学位论文2.3.3 iMEFFAK+/+细胞及 iMEFFAK-/-细胞功能差异分别采用划痕实验及 Cell Counting Kit-8 实验检测并对比 iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞的迁移及增殖能力。结果如图 2.3.3.1、图 2.3.3.2 A B 所示：iMEFFAK-/-细胞的迁移及增殖能力较 iMEFFAK+/+细胞均有不同程度下降。
本文编号：3567631
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1Westernblot分别检测iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-细胞FAK蛋白的表达
黏着斑激酶在诱导小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化过程中的作用及机制142.2.5统计学分析应用SPSS19.0软件进行数据统计学分析，数据呈正态分布，计量资料采用X±S表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验，检验水准α=0.05。2.3结果2.3.1iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞的鉴定取相同规格培养皿中iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞，在RIPA裂解液下裂解，经BCA蛋白定量后，进行Westernblot实验。结果如图2.3.1所示：iMEFFAK+/+细胞株的FAK蛋白表达阳性，iMEFFAK-/-细胞株FAK蛋白表达阴性。通过该实验证实黏着斑激酶存在并表达于小鼠胚胎成纤维细胞，同时也对细胞株进行了有效的鉴别，以供后续实验进行。图2.3.1Westernblot分别检测iMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-细胞FAK蛋白的表达Figure2.3.1TheexpressionofFAKproteininiMEFFAK+/+、iMEFFAK-/-cellswasdetectedbyWesternblot2.3.2iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态差异倒置显微镜下观察iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态的差异，结果如图2.3.2所示：iMEFFAK+/+细胞为贴壁生长的多突的纺锤形或星形的扁平细胞，多呈多角形，呈集落样生长。iMEFFAK-/-细胞较iMEFFAK+/+体积明显缩小且多呈梭形。图2.3.2光学显微镜下iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞形态改变（×200）Figure2.3.2MorphologicalchangesbetweeniMEFFAK+/+andiMEFFAK-/-cellsunderlightmicroscope（×200）
江苏大学硕士学位论文2.3.3 iMEFFAK+/+细胞及 iMEFFAK-/-细胞功能差异分别采用划痕实验及 Cell Counting Kit-8 实验检测并对比 iMEFFAK+/+细胞及iMEFFAK-/-细胞的迁移及增殖能力。结果如图 2.3.3.1、图 2.3.3.2 A B 所示：iMEFFAK-/-细胞的迁移及增殖能力较 iMEFFAK+/+细胞均有不同程度下降。
本文编号：3567631
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