滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究

发布时间：2022-01-17 15:35

　　【背景】许多研究表明,支原体的NADH氧化酶（NADH oxidase,NOX）不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能。【目的】对滑液支原体（Mycoplasma synoviae,MS）的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病过程中的潜在作用。【方法】对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化,然后对重组MSNOX （rMSNOX）的酶学活性及影响酶活的条件进行研究,测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率,接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体,分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting反应,鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况。【结果】在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达rMSNOX蛋白,相对分子质量约为53 kD,并获得纯化的rMSNOX蛋白;酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5,双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率V_max为21.8μmol/（L·min）,米氏常数K_m

【文章来源】：微生物学通报. 2020,47(03)北大核心CSCD

【文章页数】：12 页

【部分图文】：

不同NOX蛋白的序列比对

重组菌的双酶切鉴定及PCR鉴定

将重组表达菌株E.coli BL21(p ET-28a-MSnox)经IPTG诱导前的全菌蛋白、诱导后的全菌蛋白、诱导后的上清蛋白以及经His-tag标记磁珠纯化的重组蛋白进行SDS-PAGE电泳分析，结果显示重组表达菌株经IPTG诱导后，在53 kD左右有明显的蛋白表达条带，经纯化后的r MSNOX蛋白条带较纯(图4)。图3 重组菌的双酶切鉴定及PCR鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]细菌nox基因研究进展[J]. 王艳,丁承超,邱景璇,陈国薇,谢曼曼,刘箐.  微生物学杂志. 2018(05)
[2]滑液支原体醛缩酶的亚细胞定位及免疫原性[J]. 王宇,祁晶晶,刘婷,温政,闫遵祥,高崧,于圣青.  微生物学通报. 2019(04)
[3]滑液支原体WVU1853株免疫相关膜蛋白的初步分析[J]. 包世俊,丁小琴,邢小勇,伏小平,薛慧文,温峰琴.  畜牧兽医学报. 2017(02)
[4]鸡滑液囊支原体病研究进展[J]. 丁美娟,尹秀凤,黄显明,毛火云,周勇岐,张海涛,薛家宾,张小飞.  中国家禽. 2013(13)
[5]鸡毒支原体醛缩酶的原核表达及膜定位鉴定[J]. 何随彬,谭磊,包世俊,郭小琴,仇旭升,宋翠萍,费荣梅,丁铲.  中国兽医科学. 2013(01)
[6]NADH氧化酶的研究进展[J]. 卿三红,方柏山.  华侨大学学报(自然科学版). 2011(05)
[7]NADH氧化酶研究进展[J]. 李林波,罗宇,屈凌波,熊玉春,李凤娟.  河南工业大学学报(自然科学版). 2010(04)

博士论文
[1]滑液支原体膜表面丙酮酸脱羧酶的生物学特性研究[D]. 包世俊.中国农业科学院 2014

硕士论文
[1]鸡滑液囊支原体的分离鉴定及其活疫苗免疫效果的评价[D]. 石晓磊.西北农林科技大学 2018
[2]鸡滑液囊支原体JS1株的分离鉴定及禽支原体、大肠杆菌、沙门菌多重PCR检测方法的建立[D]. 刘婷.山东农业大学 2016
[3]滑液支原体乳酸脱氢酶生物学功能的研究[D]. 任峰.山西农业大学 2014
[4]鸡滑液囊支原体的分离鉴定及部分生物学特性研究[D]. 丁美娟.南京农业大学 2013



本文编号：3594986