单细胞显微注射技术在原生动物草履虫研究中的应用

发布时间：2022-01-18 21:01

　　对大多数单细胞原生动物的分子遗传学研究,目前还缺乏行之有效的转基因手段。针对这种情况,本研究以第四双小核草履虫为对象,将包含自身调控序列的草履虫纤毛内运输蛋白（intraflagellar transport,IFT）基因IFT43或IFT46插入表达载体Pzz02-GFP中,用单细胞显微注射术将重组质粒注入到第四双小核草履虫营养大核内。蛋白质免疫印记结果显示,与绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标签偶联的IFT43或IFT46在草履虫细胞中表达,利用荧光显微镜或激光共聚焦成像系统观察,IFT43-GFP与IFT46-GFP融合蛋白显示出相似的纤毛定位,同时它们在草履虫多纤毛内的运输过程被动态记录。本研究表明,显微注射方法能够在草履虫细胞中实现外源基因转入和表达,在对单细胞模式生物的研究中具有广泛的应用前景。 

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2020,36(12)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 单细胞显微注射
        1.2.1 准备质粒
        1.2.2 准备细胞
        1.2.3 显微注射
    1.3 草履虫细胞荧光观察
    1.4 总蛋白质提取和蛋白质免疫印迹分析
2 结果
    2.1 表达载体的选择
    2.2 免疫印迹证实注射后目的基因在草履虫细胞中表达
    2.3 IFT46-GFP和IFT43-GFP融合蛋白在草履虫细胞中的定位和动态运输
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]进展中的纤毛虫学研究:新格局、新窗口与新拓展[J]. 胡晓钟,赵研,黄洁,高凤,高珊,邵晨,宋微波.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2019(10)
[2]八肋游仆虫含绿色荧光蛋白基因的大核人工染色体的构建[J]. 李娜,柴宝峰,王景涛,梁爱华.  中国生物化学与分子生物学报. 2009(05)



本文编号：3595582