拟南芥DUF647家族成员RUS4植物表达载体的构建及亚细胞定位

发布时间：2022-01-28 01:02

　　ROOT UV-B SENSITIVE4 （RUS4）是拟南芥DUF647蛋白家族的一个功能未知的成员。RUS1和RUS2曾经报道和根UV-B-感应途径相关联,并在拟南芥早期幼苗形态发生和发育中发挥重要作用。为了探究RUS4的分子功能,本研究对RUS4蛋白进行了亚细胞定位分析。首先,我们通过Gateway TOPO载体系统,构建了融合蛋白表达载体pMDC83-RUS4;然后,通过农杆菌介导的花苞转化法,获得了转化pMDC83-RUS4的转基因拟南芥株系;对转基因植物叶肉原生质体的荧光显微镜观察显示,RUS4-GFP信号与叶绿体的自发荧光共定位,说明RUS4蛋白定位叶绿体中。该结果为进一步研究RUS4的分子功能奠定了良好的基础。 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(02)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pENTR/D-TOPO-RUS4入门载体的构建

我们利用液氮冻融法将pMDC83-RUS4质粒DNA转入农杆菌化学感受态细胞EHA105中，在含有利福平50 mg/L和潮霉素50 mg/L的LB抗性平板上筛选阳性克隆。随机挑取单克隆，液体培养，提取质粒DNA，利用引物RUS4-F2和GFP-R对这些克隆进行了PCR鉴定。结果显示(图4)，所有阳性克隆含有预期的重组质粒DNA。图3 p MDC83-RUS4植物表达载体的PCR鉴定

p MDC83-RUS4植物表达载体的PCR鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]人工microRNAs对拟南芥At1g13770和At2g23470基因的特异沉默[J]. 李文超,赵淑清.  遗传. 2012(03)
[2]拟南芥叶肉原生质体分离条件的优化[J]. 孙琳琳,佟少明,侯和胜.  植物生理学通讯. 2009(03)



本文编号：3613400