基于CRISPR/Cas9技术的烟草CPS2基因敲除及功能分析

发布时间：2022-02-16 12:13

　　为明确柯巴基焦磷酸合酶基因（CPS2）的功能和调控机制,利用CRISPR/Cas9技术对高香气烤烟品系8306中的CPS2基因进行定向编辑,得到了7株靶位点单碱基A/T/C插入的转化植株。利用q-PCR技术分析转化植株二萜类关键基因的表达,并利用GC/MS分析叶面分泌物成分及香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）含量（质量分数）。结果表明:（1）T0代转化植株CPS2及ABS表达量显著降低,冷杉醇和赖百当烯二醇含量也显著降低。（2）DXR表达量均显著升高,GGPP含量也大幅提高。（3）CYC-1和CYP71D16表达量差异较大,西柏三烯二醇出现小幅降低。（4）T0代转化植株的株高、茎围、叶间距、最大叶长、最大叶宽均增加。因此,敲除CPS2能够抑制赖百当类化合物合成,有助于上游途径中萜类合成前体GGPP的积累,可能抑制西柏三烯二醇积累,同时使植株表型性状发生变化。 

【文章来源】：烟草科技. 2020,53(05)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 烟草材料及载体试剂盒
    1.2 CRISPR/Cas9载体构建
    1.3 农杆菌介导的遗传转化
    1.4 转化植株目标基因靶位点序列突变检测
    1.5 转化植株二萜类关键基因相对表达量测定
    1.6 转化植株叶面分泌物及GGPP含量测定
    1.7 农艺性状调查
    1.8 数据处理
2 结果与分析
    2.1 gRNA靶位点选择及表达载体构建
    2.2 转化植株靶位点序列突变的差异分析
    2.3 转化植株二萜类物质关键基因的差异表达分析
    2.4 转化植株叶面分泌物及GGPP含量的差异分析
    2.5 转化植株农艺性状指标分析
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3627948