马的骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞和成骨细胞及其鉴定

发布时间：2022-02-26 10:31

　　本研究旨在将建立的马（Equuscaballus）骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞和软骨细胞。通过原代细胞培养获取马的骨髓间充质干细胞,并对第3代（P3）纯化细胞进行干细胞特性鉴定,之后诱导其向不同细胞分化并对诱导分化的细胞进行染色和特异性基因表达的鉴定。实验结果显示,获得的马骨髓细胞表达了干细胞转录因子和间充质干细胞表面标记物,确定获得的细胞为马骨髓间充质干细胞。P3代细胞经诱导培养后由长梭形转变为"骨结节"形态的成骨细胞和"铺路石"形态的软骨细胞。茜素红将诱导的成骨细胞团染成红色,并随着时间的递增红色"骨结节"逐步增大;阿尔新蓝则将蛋白聚糖和透明质酸等含量丰富的诱导细胞染为蓝色,并且随着诱导天数的增加被染成蓝色的软骨细胞逐渐增多,而对照组细胞未见着色。实时荧光定量PCR检测发现,成骨细胞中Col和ALPL基因的表达量随诱导时间的延长发生明显变化;普通PCR结果显示,在诱导的软骨细胞中扩增获得了collagenⅡ、aggrecan和Sox9软骨特异基因,而对照组细胞不表达特异基因。综上所述,本实验建立了马骨髓间充质干细胞并成功将其诱导分化为成骨细胞和软骨细胞,为骨组织缺损修复和软骨... 

【文章来源】：动物学杂志. 2020,55(03)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 骨髓间充质干细胞的分离培养
    1.3 马骨髓间充质干细胞转录因子及表面标志物的鉴定
    1.4 马骨髓间充质干细胞向成骨和软骨细胞的诱导分化
    1.5 染色鉴定成骨和软骨细胞
    1.6 定量PCR检测
2 结果与分析
    2.1 马骨髓间充质干细胞系的建立
        2.1.1 马骨髓间充质干细胞的分离和纯化
        2.1.2 马骨髓间充质干细胞转录因子基因的检测
    2.2 马骨髓间充质干细胞向成骨的诱导分化及鉴定
        2.2.1 马骨髓间充质干细胞向成骨的诱导分化
        2.2.2马骨髓间充质干细胞诱导成骨的染色鉴定
        2.2.3 成骨特异基因表达的鉴定
    2.3 马骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导分化及鉴定
        2.3.1 马骨髓间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化
        2.3.2 马骨髓间充质干细胞向软骨诱导分化的染色鉴定
        2.3.3 马骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的鉴定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]两种体外培养体系对人骨髓间充质干细胞原代培养、增殖和成骨分化的影响比较[J]. 徐杨,林飞跃,尹晓明.  福建医药杂志. 2019(06)
[2]牛骨髓间充质干细胞体外培养体系的优化[J]. 赵欣欣,姜禹,安星兰,翟岩辉,张胜,唐博,李子义,张学明.  中国兽医学报. 2018(05)
[3]大鼠骨髓间充质干细胞原代培养及成骨成脂分化能力染色鉴定[J]. 韩振忠,鲁艳芹,王延宙,任秀智,滕元伟,张宇昂,韩金祥.  罕少疾病杂志. 2016(02)



本文编号：3644447