盖子区域氨基酸的定点突变对T1脂肪酶酶学性质的影响

发布时间：2022-07-20 19:03

　　T1脂肪酶来源于 Geobacillus zalihae 菌株,常作为生物催化剂广泛应用于各领域。为了综合改善T1脂肪酶的酶学性质,前期通过对该酶盖子结构进行理性设计得到3个效果较好的突变体L188M、A190L、A190Y,在此基础上,将单点突变体进行组合得到L188M/A190L和L188M/A190Y两个复合突变体。在该实验中对突变体脂肪酶酶学性质展开研究,同时将单点与组合突变效果进行比较。结果显示野生型及突变体最适pH均为9.0,复合突变体的最适温度提高5℃。单点突变及组合突变均使T1脂肪酶的酶学性质得到不同程度的改善,且复合突变体效果更显著。组合突变体使脂肪酶的温度、pH稳定性显著提高,L188M/A190L对于有机溶剂二甲基亚砜及正十六烷的耐受性为野生型的1.88倍和2.73倍,L188M/A190Y为野生型的1.96倍和2.58倍。此外,对C16和C18底物的选择性也明显增强,L188M/A190L为野生型的1.65和2.7倍,L188M/A190Y为野生型的1.5倍和2.25倍。该研究成果在一定程度上拓宽了T1脂肪酶的应用前景,同时为其他脂肪酶的改造提供了一定理论依据。 

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要模拟与分析软件
        1.1.2 菌种及质粒
        1.1.3 主要实验材料
        1.1.4 主要实验仪器与设备
    1.2 方法
        1.2.1 突变体的虚拟筛选
        1.2.2 T1脂肪酶突变体构建
        1.2.3 T1脂肪酶突变体表达及纯化
        1.2.4 T1脂肪酶突变体最适温度及温度稳定性
        1.2.5 T1脂肪酶突变体最适pH及pH稳定性
        1.2.6 T1脂肪酶突变体的有机溶剂耐受性
        1.2.7 T1脂肪酶突变体的金属离子耐受性
        1.2.8 T1脂肪酶突变体的底物选择性
2 结果
    2.1 突变体的虚拟筛选
    2.2 T1脂肪酶突变体的表达及纯化鉴定
    2.3 T1脂肪酶突变体最适温度及温度稳定性
    2.4 T1脂肪酶突变体的最适pH及pH稳定性
    2.5 T1脂肪酶突变体的有机溶剂耐受性
    2.6 T1脂肪酶突变体的金属离子耐受性
    2.7 T1脂肪酶突变体的底物选择性
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]金属离子对重组深渊滕黄单胞菌低温α-淀粉酶LamA的活性和稳定性影响[J]. 孙清扬,张静静,李冰清,王岩,张晓华.  微生物学通报. 2019(11)
[2]基于氨基酸序列和模拟结构预测蛋白质稳定性的研究进展[J]. 易华伟,唐晓峰.  生物技术通报. 2017(04)
[3]固定化嗜热嗜碱土芽孢杆菌T1脂肪酶的制备及其催化特性研究[J]. 汪璞,王方华,唐庆芸,王永华,杨博.  现代食品科技. 2015(05)
[4]脂肪酶及其在食品工业中的应用(英文)[J]. WANG Ting,QIN Gang(College of Food Science,Southwest University,Chongqing 400716 China).  肉类研究. 2010(09)
[5]黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性的影响[J]. 薛龙吟,林瑞凤,舒正玉,黄建忠.  生物技术通报. 2010(02)

硕士论文
[1]疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母表面展示[D]. 黄奎.华南理工大学 2017
[2]扩展青霉脂肪酶“盖子”结构域突变对其活性影响的研究[D]. 林瑞凤.福建师范大学 2010



本文编号：3664581