棒曲霉孢子发育相关基因flbA的克隆和缺失突变株的鉴定

发布时间：2022-08-02 11:26

　　在模式真菌构巢曲霉中,FlbA蛋白位于分生孢子中心调控途径上游,对分生孢子的形成起激活作用.研究以1株实验室筛选的高产洛伐他汀棒曲霉Ac-32专利菌株的基因组为模板,克隆分生孢子发育相关基因flbA,用双接头PCR法构建flbA基因敲除盒,用根癌农杆菌介导转化法构建棒曲霉转化子库,依据转化子表型特征和分子特征鉴定flbA基因缺失突变株.结果表明:flbA基因全长为2 208 bp,翻译对应的氨基酸为734个,理论分子量和等电点分别为78 798.75 Da和8.64;棒曲霉与构巢曲霉flbA基因序列同源性为69.9%,氨基酸序列的同源性为76.6%;构建了flbA基因敲除盒和敲除载体,获得了258株棒曲霉转化子,经鉴定得到了1株flbA基因缺失突变株.研究成果为后续探讨棒曲霉flbA基因功能提供了材料,并奠定了理论基础. 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材 料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 主要培养基
    1.2 方 法
        1.2.1 棒曲霉Ac-32菌株的培养和基因组DNA的提取
        1.2.2 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因的克隆、测序和信息学分析
            1)flbA基因的克隆和测序:
            2)flbA基因的信息学分析:
        1.2.3 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除盒的构建
            1)flbA基因5′端、3′端侧翼序列和hph基因片段的扩增和测序
            2)flbA基因的5′端、3′端侧翼序列和hph基因片段的连接
        1.2.4 flbA基因敲除载体的构建和农杆菌的转化
        1.2.5 敲除载体转化棒曲霉Ac-32菌株和flbA基因缺失突变株的筛选
2 结果与分析
    2.1 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因的序列和同源性
        2.1.1 flbA基因的克隆和序列
        2.1.2 flbA基因核苷酸序列和对应氨基酸的同源性
    2.2 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除盒的构建
        2.2.1 flbA-5′,flbA-3′和hph基因片段的扩增结果
        2.2.2 flbA-5′,flbA-3′和hph基因片段的连接
    2.3 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除载体的构建和农杆菌的转化
    2.4 农杆菌介导敲除载体(pKO1B-flbA)转化棒曲霉Ac-32菌株
    2.5 ΔflbA-86基因缺失株表达水平的鉴定
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]色素生物合成相关PigE基因的缺失对紫色红曲霉Mp-21黄色素种类和产量的影响（英文）[J]. 王嘉琦,张琪,江北,吕梦霞,蒋冬花.  微生物学报. 2019(08)
[2]海鞘内生真菌棒曲霉Aspergillus clavatus AS-107的化学成分研究[J]. 宋琦,李晓明,胡雪怡,杨遂群,王斌贵.  海洋科学. 2019(02)
[3]高产洛伐他汀棒曲霉菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化[J]. 章婷,Bedelkhan Almagul,郑婕施,韩肖飞,任浩,蒋冬花.  工业微生物. 2016(06)
[4]FluG-BrlA途径参与构巢曲霉无性发育机制的研究进展[J]. 鲍龙飞,秦玉琪,曲音波.  微生物学通报. 2014(01)
[5]一种载体构建的新方法:重组融合PCR法[J]. 邝翡婷,袁定阳,李莉,李新奇.  基因组学与应用生物学. 2012(06)



本文编号：3668433