miR-150下调Notch3抑制人脂肪干细胞成骨分化

发布时间：2022-12-10 19:17

　　目的 :探讨miR-150调控Notch3对人脂肪干细胞（hADSCs）成骨分化的影响。方法 :体外分离和培养hADSCs,将其分为空白对照组（NC组）、绿色荧光蛋白对照组（GFP组）和过表达miR-150组（miR-150组）。实时荧光定量PCR法检测各组hADSCs miR-150的表达,免疫印迹检测hADSCs中成骨标志物RUNX-2、Notch3的表达。构建Notch3敲低的hADSCs组（Notch3-siR组）、GFP组和NC组,免疫印迹检测3组hADSCs Notch3的表达。利用成骨细胞诱导液定向诱导各组hADSCs向成骨细胞分化,免疫印迹检测各组hADSCs RUNX-2的表达。结果 :hADSCs成骨诱导14 d期间,miR-150表达逐渐下降。miR-150组的Notch3表达明显低于GFP组和NC组。经体外成骨诱导后,miR-150组RUNX-2蛋白表达水平低于GFP组和NC组。敲低Notch3后体外诱导hADSCs,Notch3-siR组RUNX-2蛋白的表达水平低于GFP组和NC组。结论 :miR-150通过下调Notch3表达抑制hADSCs成骨分化。 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 主要试剂
    1.2 h ADSCs的分离和培养
    1.3 h ADSCs成骨分化过程中mi R-150的表达
    1.4 h ADSCs的感染与转染
    1.5 Real-time PCR检测mi R-150-5p的表达
    1.6 荧光素酶报告实验分析mi R-150的下游靶基因
    1.7 h ADSCs的成骨诱导
    1.8 免疫印迹检测Notch3和RUNX-2蛋白的表达
    1.9 统计学处理
2 结果
    2.1 h ADSCs成骨诱导过程中mi R-150的表达变化
    2.2 过表达mi R-150可抑制h ADSCs的成骨分化
    2.3 mi R-150靶向调控Notch3
    2.4 Notch3的下调减弱了h ADSCs的成骨分化
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-150在骨髓间充质干细胞分化中的作用及其可能的机制[J]. 郭伟壮,兰涛,杨欣建,田长庆.  黑龙江医学. 2019(10)
[2]不同浓度细胞松弛素D对人脂肪源干细胞分化能力的影响[J]. 樊庭宇,曲戎梅,冯雁婷,彭彦,张仔昂,欧阳钧,戴景兴,钟世镇.  中国临床解剖学杂志. 2018(01)
[3]人脂肪源干细胞促进前交叉韧带重建后腱骨界面愈合的实验研究[J]. 陈平,曲戎梅,韩忠宇,杨宇超,尹玉琨,田京,张力.  中国临床解剖学杂志. 2016(06)
[4]自体骨髓经皮注射移植治疗骨不连和骨延迟愈合的临床应用观察[J]. 刘瑞祥,陈琪,涂江虹,梁海,欧阳阳钢,娄楠,廖家成.  内蒙古医学杂志. 2015(04)

博士论文
[1]MicroRNAs调控人脂肪源性干细胞成骨分化及ODN影响其调控的研究[D]. 王敏.吉林大学 2010



本文编号：3717367