TGF-β1基因过表达慢病毒载体构建及转染比格犬骨髓间充质干细胞的鉴定

发布时间：2024-03-30 13:42

　　[目的]器官移植术后需要使用广谱免疫抑制剂治疗器官移植术后免疫排斥,寻求一种可替代或减少免疫抑制剂使用或增加免疫靶向性的方法。课题结合转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor β1,TGF-β1)的免疫抑制、免疫调节作用与间充质干细胞的低免疫原性、免疫抑制性的特性,构建比格犬TGF-β1基因过表达慢病毒载体,转染比格犬骨髓间充质干细胞(Canine mesenchymal stem cells,cMSCs)并进行鉴定。[方法]1、采用OligoMix(?)寡核苷酸合成法得到全基因,PCR进行比格犬TGF-β1目的基因纯化,琼脂糖电泳回收并鉴定目的基因片段。以获取的目的基因(犬)TGF-β 1 与慢病毒载体利用 ClonExpress(?)Entry One Step Cloning Kit 将两者连接构建携带目的基因的LV5载体。培养制备以大肠杆菌为媒介的感受态细胞,以氯化钙法完成菌悬液转染感受态细胞。抽提质粒行双酶切鉴定,并将阳性克隆与目的基因(犬)TGF-β 1进行测序比对,用于后续实验。2、首先选用购进的293T细胞进行细胞复苏、计数、传代、冻存。...

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综述 Foxp3在免疫耐受平衡中的相关作用机制
    参考文献
攻读学位期间获得的学术成果
致谢



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