镉暴露对河南华溪蟹vasa及其作用途径分子的影响

发布时间：2024-04-21 18:38

　　生殖细胞的发生对机体的延续和繁衍起关键作用,是复杂的分子调控过程,vasa、nanos和piwi基因是重要的生殖调控分子,对生殖细胞的发生起调控作用。与模式生物相比,十足目动物生殖调控的分子机制仍不清楚,因此,亟待开展十足目生殖基因的功能研究。本论文在前期研究基础上,以河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)为研究对象,通过Western blot和荧光免疫组织化学揭示了河南华溪蟹VASA蛋白的表达模式,结合RNA干扰技术,对其功能进行了分析,在此基础上,通过检测镉暴露后vasa基因及其相关基因的变化,阐明了镉对河南华溪蟹生殖调控的毒性机制。研究结果如下:1.河南华溪蟹VASA蛋白的表达和定位本实验采用Western blot和荧光免疫组织化学技术,对VASA蛋白在河南华溪蟹卵巢发育不同时期的表达和卵母细胞发育中的定位情况进行了研究。Western blot结果显示,随着卵巢的发育,VASA蛋白量逐渐升高,大生长期开始降低,成熟期达到最低。荧光免疫组织化学结果显示,在卵原细胞中,VASA蛋白均匀分布于细胞质;卵黄发生早期的卵母细胞中,大量VASA蛋白在细胞质中分布,少量...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1检测不同发育时期卵巢组织中VASA蛋白的表达1：增殖期卵巢；2：小生长期卵巢；3：大生长期卵巢；4：成熟期卵巢

次，每次10min。(15)用抗淬灭剂封片，镜检。(16)用激光共聚焦显微镜观察。2结果2.1不同发育时期卵巢中VASA蛋白的表达Westernblot检测不同发育时期卵巢中VASA蛋白量结果如图2.1所示：VASA蛋白在卵巢的不同发育时期中均有表达....

图2.2荧光免疫组织化学检测VASA蛋白在不同发育时期卵母细胞中的定位A1-J1：VASA蛋白；A2-J2：PI；A3-J3：Merge(VASA蛋白与PI信号的叠加)；Oo：卵原细胞；OI和OII：卵黄发生早期卵母细胞；OIII和OIV：卵黄发生中期卵母细胞；OV和OVI：卵黄发AC

镉暴露对河南华溪蟹vasa及其作用途径分子的影响16VASAPIMerge图2.2荧光免疫组织化学检测VASA蛋白在不同发育时期卵母细胞中的定位A1-J1：VASA蛋白；A2-J2：PI；A3-J3：Merge(VASA蛋白与PI信号的叠加)；Oo：卵原细胞；OI和OII：卵黄发....

图3.1Westernblot检测不同镉浓度暴露后VASA蛋白在不同发育时期表达量的变化

第三章镉暴露对河南华溪蟹VASA蛋白的影响212结果2.1镉暴露对各发育时期卵巢VASA蛋白表达量的影响不同镉浓度暴露后，各个发育时期卵巢中VASA蛋白的表达规律各不相同。结果显示：如图3.1A和B所示，随着镉浓度的升高，增殖期和小生长期的卵巢VASA蛋白量呈现出逐渐降低的趋势；....

图4.1河南华溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的克隆A：河南华溪蟹nanos2基因；M：DNAmarker;1和2：nanos2

溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因在体内不同组织和不同发育时期卵巢中的表达情况。分别以卵巢、精巢、副性腺、鳃、心、肝胰腺、肠、胃、肌肉组织cDNA为模板，和以增殖期、小生长期、大生长期、成熟期的卵巢cDNA为模板，以nanos1-F/R、nanos1-F/R、piwi-....

本文编号：3961297