人源Parkin蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中的异源表达和纯化

发布时间：2024-05-29 03:45

　　目的在大肠杆菌中异源表达和纯化人源Parkin蛋白。方法构建带有人源Parkin基因的克隆载体,测序保证Parkin基因序列正确后,构建异源表达载体pET-28a/Parkin;在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导人源Parkin蛋白过表达,采用镍亲和色谱纯化人源Parkin蛋白,用Western印迹(WB)和荧光分光光度法评价人源Parkin蛋白活性。结果人源Parkin蛋白在E.coli BL21(DE3)中获高表达,经镍亲和色谱纯化后除去了大量杂蛋白,得到富集;WB和荧光分光光度法检测均证实异源表达的人源Parkin蛋白具有生物活性。结论通过异源表达技术获得高纯度的且具有生物活性的人源Parkin蛋白,可用于Parkin调节剂的快速筛选与研究。

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【部分图文】：

图5Parkin蛋白质表达

图4重组质粒PCR验证及菌落PCR验证图6Parkin经Ni-NTA柱纯化后的SDS-PAGE检测

图7Western印迹法检测人源Parkin蛋白活性

图6Parkin经Ni-NTA柱纯化后的SDS-PAGE检测图8荧光分光光度法检测人源Parkin蛋白活性

图8荧光分光光度法检测人源Parkin蛋白活性

图7Western印迹法检测人源Parkin蛋白活性3讨论

图2Parkin基因序列测序结果

图1Parkin经PCR扩增的凝胶电泳图图3重组质粒酶切验证

本文编号：3984031