莱茵衣藻E2泛素结合酶CrUBC23调控油脂积累

发布时间：2024-06-02 14:26

　　【目的】为研究莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)泛素结合酶(ubiquitin-conjugatingenzymes,E2) CrUBC23在莱茵衣藻油脂代谢中的作用,为高产油微藻基因工程改良和揭示藻类油脂合成及代谢调控机理奠定基础。【方法】qRT-PCR分析莱茵衣藻在低氮、低磷胁迫下泛素结合酶CrUBC23表达情况;克隆CrUBC23同源基因干涉片段和全长基因,构建RNAi干涉载体和过量表达载体,转化莱茵衣藻并检测生物量和油脂含量;构建CrUBC23-GFP融合表达载体,用农杆菌浸染洋葱表皮细胞进行亚细胞定位。【结果】莱茵衣藻在低氮、低磷胁迫下CrUBC23基因表达量显著增加,增加幅度分别为正常培养的4.98–5.80倍和1.85–5.20倍。RNAi干扰结果显示,转基因藻细胞中性脂含量降低5.5%,总脂含量降低3.16%–17.6%。过量表达结果显示,转基因藻细胞中性脂含量增加8.8%,总脂含量增加4.51%–14.03%。【结论】CrUBC23正向调控莱茵衣藻油脂代谢,该基因定位于细胞核。

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【部分图文】：

图1.莱茵衣藻CC425缺氮(A)、缺磷(B)培养下CrUBC23mRNA水平

qRT-PCR结果显示，莱茵衣藻CC425在正常培养、缺氮培养(HSM-N)、缺磷培养(HSM-P)下，随着培养时间的增长CrUBC23mRNA水平显著升高。在缺氮培养下CrUBC23mRNA水平显著增加，第3天达到最大值，之后缓慢下降，CrUBC23mRNA水平是对照(CC....

图2.CrUBC23与其他物种同源性比较

通过PCR扩增获得CrUBC23干涉片段(图3-B-a)，插入pMD18-T，分别用HindⅢ/BamHⅠ和XbaⅠ/SalⅠ双酶切获得正反向干涉片段(图3-B-b)，依次插入T282载体，获得中间载体，EcoRⅠ酶切中间载体获得含有CrUBC23正反向结构的片段，插入pM....

图3.CrUBC23转基因藻株构建

图2.CrUBC23与其他物种同源性比较2.4CrUBC23RNAi转基因藻株生物量及油脂含量测定

图4.CrUBC23RNAi转基因藻株分析

尼罗红染色法测定了96株CrUBC23RNAi转基因藻株和54株pMaa7IR/XIR转基因藻株中性脂含量，CrUBC23RNAi转基因藻株平均NFFluorescence/DW值为894，对照pMaa7IR/XIR平均NFFluorescence/DW值为1390(图4....

本文编号：3987373