海水中胃肠道感染病毒的病原性检测及风险评价

发布时间：2024-06-29 03:24

　　胃肠道感染病毒是除细菌之外的引起胃肠道疾病的主要病原体之一，通过接触娱乐用水或食用被污染的贝类感染人体。这类病毒主要来源于人畜粪便等排泄物污染的生活污水，在各种水环境中普遍存在，并且存活时间长，感染剂量低，可以通过娱乐用水或食用海产品感染人类。因此，建立其快速、高效的检测技术，对于水传播疾病的预防和控制是迫切需要的。然而目前尚没有一种同时确定其感染性和快速定量的方法，给人体健康风险评估带来了很大的障碍。因此，本论文从这一点出发，开展了以下相关的工作。 选取具有指示作用的胃肠道感染病毒—肠道病毒(EV)和感染性最强的胃肠道感染病毒—轮状病毒(RV)为指示微生物，实现以下目标：1.建立快速定量水环境中具有感染性病毒浓度的方法，同时探讨不可培养病毒的病原性检测方法；2.将此方法在渤海湾天津海域进行了应用与可行性分析；3.通过探讨病毒在海洋环境中的存活时间和灭活机理，对病毒感染人体的健康风险进行了实际评估。 主要研究内容和研究成果如下： 1.分别建立了肠道病毒代表种脊髓灰质炎病毒(PV)和RV的细胞培养结合实时定量PCR(ICC-qPCR)检测方法，克服了细胞培养和实时定量PCR技术单独作用时...

【文章页数】：154 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图2.1Vero细胞形态（×100），（a）：正常Vero细胞；（b）：病变Vero细胞

图2.1Vero细胞形态（×100），（a）：正常Vero细胞；（b）：病变Vero细胞2.2.4.2空斑法测定病毒滴度致细胞病变的病毒，能够在固态琼脂培养基覆盖下的细胞单层中形成肉可见的空斑，通过计数形成空斑的数量可准确地测定病毒滴度[96]。操作过程为1）接....

图2.2PV1在Vero细胞上形成的空斑（稀释106倍）

.2PV1在Vero细胞上形成的空斑（稀释10real-timePCR方法的建立erPrimier5.0，根据脊髓灰质炎度保守区5′UTR设计引物（PqF/PqRst功能检测引物和探针的特异性；R设计实时定量PCR（real-timePCR）....

图2.3脊髓灰质炎病毒电泳图，其中（a）为构建质粒的扩增片段（M：DL2000Marker；

扩增产物经电泳检测，结果如图2.3（d）所示。（a）（b）（c）（d）图2.3脊髓灰质炎病毒电泳图，其中（a）为构建质粒的扩增片段（M：DL2000Marker；1：阴性对照；2：目的片段）；（b）连接后载体引物扩增片段（M：Marker；1-5泳道为连接片段）；（c....

图2.4肠道病毒实时定量PCR标准曲线（a）和扩增曲线（b）

斜率为-3.407（有效范围-3.5≤斜率≤-3.0），E=95.5﹪，各项参数指标良好，并且稳定性高，阴性对照无产物扩增，可以作为后续的标准曲线（图2.4（a））。（1）灵敏度测试将标准品按10倍梯度稀释，至终浓度为1.0×100～1.0×109拷贝数/μL，分别取1μL为模....

本文编号：3997093