CREB在小鼠眼睛发育中的磷酸化与SUMO化分析

发布时间：2023-04-08 01:27

　　眼睛是动物和人类重要的视觉器官。就其结构而言,它包括角膜、晶体状和视网膜三个主要组织。在感光生理过程中,角膜把光线折射到晶状体上,由晶状体聚焦到视网膜上,通过视网膜视锥和视杆细胞的接受,并转变为电信号,由中间神经元传递至神经节细胞经视交叉进入大脑,形成外面的图像。在眼睛发育过程中,外胚层细胞经视泡诱导成为增厚形成晶体板,通过细胞内转和延伸形成晶体泡。晶体泡后面的细胞向中央移动,分化成晶状体初级纤维细胞,填满中央的空心位置。随后晶体泡前端的上皮细胞向亚赤道区迁移,分裂后其中一个细胞分化形成次级纤维细胞。成体晶状体由前端的上皮细胞和充满晶状体的纤维细胞构成。在晶状体发育过程中一系列转录因子调控着晶状体的发育。环腺苷应答元件给合蛋白CREB是调节大脑生理功能的重要转录因子。我们最近的研究表明,CREB在晶状体的应激反应中,其133号位点的丝氨酸被磷酸化,由此激活其转录功能,负性调节alphaB晶体蛋白的表达,促进晶体上皮细胞凋亡。CREB是否介导晶状体的分化则尚待进一步确定。本论文运用现代分子生物学的研究方法首次阐明在小鼠晶状发育过程中,CREB在不同发育时期的表达水平和活性状态。结果表明,...

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1 晶状体的发育过程
    2 CREB概述
        2.1 CREB的结构
        2.2 CREB激活的通路
        2.3 CREB的生物学功能
    3 翻译后修饰磷酸化与SUMO化概述
        3.1 蛋白磷酸化与SUMO化的过程
        3.2 磷酸化与SUMO的生物学作用
第二章 材料、试剂与实验方法
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验耗材与试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 小鼠眼球取材
        2.2 提取组织蛋白
        2.3 蛋白质免疫印迹(Western Blot)
        2.4 石蜡切片
        2.5 免疫组化DAB染色
        2.6 组织免疫荧光
        2.7 小鼠胚胎眼球取材
        2.8 免疫共沉淀实验(Co-IP)
第三章 实验结果分析
    1.免疫组化分析CREB在胚胎小鼠晶状体发育过程中的表达与激活(S133位点磷酸化状态)
    2.免疫印迹检测CREB在出生后小鼠晶状体中的表达与激活
    3.免疫荧光分析CREB与 SUMO1和SUMO2/3 的共定位
    4.免疫共沉淀分析CREB是否与SUMO1 或者SUMO2/3 共价结合
第四章 讨论及研究展望
参考文献
研究生期间论文发表情况
致谢



本文编号：3785721