美洲大蠊成虫肠道细菌多样性研究

发布时间：2023-04-24 23:51

　　昆虫是动物界中最大的类群,现存种类已超过100万种。我国昆虫资源相当丰富,约占世界昆虫总数的10%。昆虫共生菌可能是新型天然产物的广泛来源和新活性天然产物的重要来源,但是昆虫肠道微生物的研究尚欠系统和深入,所涵盖的昆虫种类仅零星见于少数,如蝎子、蜜蜂等。较为详细的研究主要集中在白蚁,还有松毛虫等农作物害虫,而美洲大蠊肠道微生物的研究鲜有报道。本研究主要运用数值分类,BOX-PCR, PCR-RFLP和16S rRNA基因序列的系统发育分析以及免培养方法对样品中内生细菌多样性进行研究,结果表明,美洲大蠊成虫肠道内有较为丰富的细菌多样性。主要结果如下：数值分类的分析结果表明,32株代表菌株在82%相似水平上可分为12个表观群,群11是最大的类群,包含14株细菌；而代表菌株SCAU13, SCAU78, SCAU23, SCAU75, SCAU9, SCAU92分别单独成群。在PCR-RFLP分析中,用四种限制性内切酶(HaeⅢ, HinfⅠ, TaqⅠ, MspⅠ)处理后,HaeⅢ有8种酶切图谱类型,HinfI有7种酶切图谱类型,TaqI有3种酶切图谱类型,MspⅠ有2种酶切图谱类型,酶H...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1. 文献综述
    1.1 昆虫肠道微生物的研究进展
    1.2 蟑螂肠道微生物
        1.2.1 蟑螂简介
        1.2.2 蟑螂肠道微生物研究进展
    1.3 肠道微生物对昆虫的作用
        1.3.1 参与代谢,提供营养物质
        1.3.2 定殖抗力
        1.3.3 参与多重营养关系
        1.3.4 肠道微生物激起昆虫的免疫反应
        1.3.5 抗捕食作用
    1.4 微生物多样性研究方法
        1.4.1 表型多样性研究
        1.4.2 遗传多样性研究
    1.5 立题依据及研究意义
2 技术路线
3 实验材料与方法
    3.1 样品采集及分离纯化
    3.2 蟑螂肠道细菌表型多样性的鉴定
        3.2.1 菌落特征
        3.2.2 菌体形态特征
        3.2.3 数值分类
    3.3 内生细菌16S RRNA PCR扩增
        3.3.1 细菌DNA提取
        3.3.2 细菌16S rRNA PCR扩增
    3.4 16S RRNA PCR-RFLP指纹图谱分析
    3.5 BOX-PCR指纹图谱
    3.6 16S RRNA基因的系统发育分析
    3.7 物种多样性分析
    3.8 免培养方法对美洲大蠊肠道细菌多样性的研究
        3.8.1 细菌总DNA的提取
        3.8.2 16S rRNA PCR扩增
        3.8.3 PCR扩增产物的纯化
        3.8.4 克隆子的筛选
        3.8.5 对阳性克隆子进行RFLP分析
        3.8.6 16S rRNA基因的系统发育分析
    3.9 实验结果处理
        3.9.1 数值分类
        3.9.2 BOX-PCR和16S rRNA PCR-RFLP酶切图谱分析
4 结果与分析
    4.1 内生菌的分离纯化
    4.2 表型多样性分析
    4.3 遗传多样性分析
        4.3.1 16S rRNA PCR-RFLP指纹图谱分析
        4.3.2 BOX-PCR指纹图谱及聚类分析
    4.4 纯培养细菌16S RRNA基因序列类群多样性
    4.5 菌株遗传多样性
    4.6 免培养方法研究美洲大蠊肠道细菌多样性
        4.6.1 美洲大蠊肠道微生物基因组16S rRNA PCR扩增
        4.6.3 阳性克隆子鉴定
        4.6.4 阳性克隆子RFLP分析
        4.6.5 16S rRNA序列分析
5 讨论
6 结论
7 展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文



本文编号：3800273