墨西哥钝口螈趾部再生过程中基质金属蛋白酶基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9的鉴定、表达模式和功能分析

发布时间：2023-08-14 19:38

　　近年来对于再生过程的研究非常热门。蝾螈作为再生研究的模式生物有着不可代替的优势。蝾螈在进化上属于脊椎动物,再生能力却没有像其他脊椎动物退化严重,其趾可以同源到人类的手指。并且对于人类有限的指再生能力,使得蝾螈趾再生相对于附肢再生的研究更有应用前景。然而到目前为止,对于蝾螈趾部再生研究的报道甚少。本文首次开展了墨西哥钝口螈趾部切除再生的相关实验,包括研究再生过程形态组织学分析及基质金属蛋白酶(MMPs)的时空表达模式和功能等。首先开展了趾部再生形态学观察,蝾螈的趾部再生周期为5-6周。HE染色组织学分析,将趾部再生分3个阶段。创伤愈合期,手术创伤几小时后伤口附近表皮细胞迁移形成单层伤口表皮(WE)覆盖住伤口；芽基形成期(创伤后3-10天),在增厚的WE(或称顶表皮帽,AEC)下方间质细胞聚集,进一步形成了锥体型结构的再生芽基；分化和形态发生期,14天时在芽基内部出现分化的软骨细胞,继而经过复杂的分化和形态发生过程,形成血管、骨骼等,组装成完整的趾。其次通过原位杂交技术对再生过程中相关的MMPs家族重要基因进行时空表达模式探究。结果显示,3个基因主要在创伤愈合期和芽基期以特定形式表达。MM...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 综述
    1. 再生及蝾螈再生研究进展
        1.1 再生研究概况
        1.2 蝾螈与其再生简介
        1.3 蝾螈附肢再生过程
        1.4 蝾螈再生研究价值
    2 基质金属蛋白酶研究进展
        2.1 研究背景
            2.1.1 分子技术背景
            2.1.2 MMPs研究趋势
        2.2 MMPs种类及特性
        2.3 再生中的MMPs研究
        2.4 MMPs功能活动小结
    3 研究目的及意义
    4 研究路线
第二章 墨西哥钝口螈趾部再生的形态学观察和组织学分析
    1 研究的目的和意义
    2 实验材料和实验内容
        2.1 实验对象——墨西哥钝口螈（mbystoma mexicanum)
        2.2 实验药品
        2.3 实验仪器
        2.4 实验流程
        2.5 实验方法
    3 实验结果与讨论
        3.1 蝾螈趾部分的再生情况
        3.2 蝾螈再生趾头的HE染色结果
        3.3 讨论
    4 总结
第三章 蝾螈趾部再生相关基质金属蛋白酶基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9鉴定与时空表达模式研究
    1 前言
    2 实验材料及用品
        2.1 实验对象——墨西哥钝口螈(Ambystoma mexicanum)
        2.2 主要化学试剂及仪器设备
        2.3 主要仪器设备
    3.实验方法
        3.1 实验技术路线
        3.2 引物的设计
        3.3 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段的克隆
        3.4 原位杂交
            3.4.1 实验所用试剂及配制方法
            3.4.2 探针合成
            3.4.3 组织原位杂交步骤
        3.5 Real-Time qPCR
    4 结果
        4.1 基因MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9片段克隆
            4.1.1 基因片段克隆模板的制备
            4.1.2 基因编码区片段的PCR扩增
            4.1.3 基因PCR产物的回收、纯化
            4.1.4 原核重组子构建
            4.1.5 MMP3/10a、MMP3/10b和MMP9的克隆测序结果
        4.2 MMPs在趾部再生过程中的表达模式
            4.2.1 RNA探针的合成
            4.2.2 原位杂交
        4.3 MMPs在趾部再生不同时期相对表达量
    5.讨论与小结
    6.总结
第四章 MMPs酶活性鉴定
    1 试剂
    2 酶谱SDS-PAGE
    3 结果与讨论
    4 小结
第五章 总结
参考文献
附录
致谢
个人简历
发表的学术论文



本文编号：3841935