多重sgRNA-CRISPR/Cas9系统的构建和在基因组成像中的初步应用

发布时间：2024-01-27 10:03

　　目的:人类细胞核内存在着46条致密染色质,它们在不同的基因组尺度下具有不同的染色质折叠,这可能使基因组能够进行有效的组装和功能组织。目前,研究染色质折叠的技术主要有染色质构象捕获(3C)技术和成像技术,但他们大多数只能用于固定细胞的研究。然而,活细胞染色质折叠的研究对于理解染色质时空组织与基因功能的关系至关重要。近年来,CRISPR/Cas9成像技术已经被证明可以有效用于活细胞染色质折叠研究,该技术可以对染色质位点进行活细胞成像。在本课题中,我们构建了多重sgRNA-CRISPR/Cas9系统,目的是利用该系统初步实现染色质位点的成像,并为活细胞染色质折叠的研究提供理论基础。方法:本课题构建质粒的方法有连接、重组、Golden-gate克隆,构建过程中用HiPure Gel Pure Micro Kit(D2111-03)回收凝胶DNA,用HiPure Plasmid Micro Kit C(P1001-03C)提取质粒。采用lipo3000转染细胞,然后利用激光共聚焦显微镜成像观察,最后用ImageJ处理成像数据。结果:1.CRISPR-Cas9双光系统可以实现重复基因组序列的成像。...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究三维染色质结构的方法
    1.2 CRISPR/Cas9 系统
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
第三章 结果
    3.1 双光系统可以实现重复基因组序列的成像
    3.2 质粒依赖的多重sgRNA组装系统
    3.3 非重复基因组序列的成像
第四章 讨论
    4.1 双光系统的构建及应用
    4.2 多重sgRNA组装系统构建
    4.3 创新点、不足及需继续深入研究的内容
结论
参考文献
综述
    参考文献
简历
致谢



本文编号：3886758