流产布鲁菌免疫原性蛋白筛选及胶体金试纸条的初步研究

发布时间：2024-05-18 13:58

　　布鲁菌病是一种重要的人畜共患病。主要引起反刍动物流产、不育和人类的慢性感染和波状热。在全世界广泛分布,对人类的健康和畜牧业的发展造成严重的危害。目前准确诊断该病是控制布鲁菌病的关键。传统检测方法的敏感性和特异性不理想,且实验条件要求高。常见的血清学诊断方法有假阳性现象存在。因此,开发一种灵敏、便捷、特异的检测方法对于布鲁菌病诊断具有十分重要的意义。在本研究中,我们完成了三部分研究内容:1)布鲁菌已报道主要免疫原性蛋白的筛选。通过对BALB/c小鼠腹腔注射流产布鲁菌S2308株的方法,建立小鼠感染模型。评估了已报道的布鲁菌主要免疫原性蛋白的OMP16、BP26、BLS、BCSP31、VirB12、SodC和GroEL在布鲁菌感染不同阶段抗体生成规律,探讨了它们在布鲁菌病诊断中的应用。在随后研究中,通过免疫印迹试验评估了7种蛋白对44例临床牛血清的检测效果。2)筛选流产布鲁菌新的免疫原性蛋白。通过免疫印迹试验分析流产布鲁菌感染小鼠不同阶段的血清中以及临床牛羊布鲁菌病阳性血清中抗体生成规律和特点,确定布鲁菌主要免疫原性蛋白的相对区域。通过SDS-PAGE分离布鲁菌总蛋白,对照免疫印迹试验结果...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.布鲁菌免疫原性蛋白的原核表达及纯化

流产布鲁菌免疫原性蛋白筛选及胶体金试纸条的初步研究183.结果与分析3.1布鲁菌感染过程中主要免疫原性蛋白的筛选3.1.1蛋白在不同原核表达系统中表达和纯化选择OMP16、BP26、BLS、BCSP31、VirB12、SodC和GroEL蛋白作为布鲁菌病的诊断抗原。利用pCold....

图2.小鼠在布鲁菌感染期间的抗体产生情况

山东农业大学硕士专业学位论文19BLS、BCSP31和SodC蛋白相比，OMP16、VirB12和GroEL蛋白的抗体水平较低。抗BP26和BLS蛋白的抗体在约4周时产生，然后维持在高抗体水平，直到第22周。此外，抗BCSP31和抗SodC抗体分别于6周和8周诱导产生，然后保持在....

图3.免疫原性蛋白与牛标准血清反应Figure3.Reactionofimmunogenicproteinwithbovinestandardserum

（图3A和B）。为了消除SUMOtag蛋白的干扰，我们将BP26蛋白在含有6×Histag的pColdI表达系统中重新表达（图4）。免疫印迹试验结果显示，6×His-BP26仍然与标准的布鲁菌阳性和阴性血清反应（图3C）。LPS阳性对照与阳性血清反应良好，与阴性血清无反应，6×H....

图4.BP26蛋白在pColdI质粒中的表达Figure4.ExpressionofBP26proteininpColdIplasmid

粜匝?搴鸵跣匝?宸从?M:蛋白标志物;1:S-OMP16蛋白;2:S-BP26蛋白;3:S-BLS蛋白;4:S-BCSP31蛋白;5:VirB12蛋白;6:SodC蛋白;7:GroEL蛋白;8:脂多糖;9:表达6×His-BP26蛋白的BL21细胞的细菌裂解液;10:含有空载的B....

本文编号：3977027