质谱鉴定中药阿胶的胶原蛋白和糖胺聚糖及研究糖胺聚糖与趋化因子的相互作用
发布时间：2022-07-13 20:56
胶类中药是动物类中药的重要组成,其中阿胶（Colla Corii Asini,CCA）的生产规模和市场销量都处于领先。CCA的药理作用主要为改善代谢平衡、滋阴补血和调节免疫功能。CCA中的生物大分子主要为蛋白质和糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）,目前对于CCA的研究还不够全面,因此本论文的第一个目标是研究CCA中生物大分子的结构,研究皮样和胶样中蛋白及糖胺聚糖的组成,建立相关的质谱分析方法。GAG与蛋白的相互作用在生物体内发挥重要功能。在CCA研究中我们对蛋白序列和GAG糖单元进行了分析,但GAG和蛋白的相互作用研究需要更复杂的质谱分析方法和其它新的技术。通过CCA建立的质谱分析方法可对蛋白和GAG进行初步的分析,而对于复杂的糖蛋白混合物的序列长度、糖基化种类、糖链、糖基化位点的定性及定量还需要在其基础上进一步的方法开发。因此本文的剩余篇幅聚焦于复杂度更高的糖蛋白异型体的分析方法开发以及结合生物膜干涉技术（Bio-layer Interferometry,BLI）和亲和柱技术的GAG与趋化因子的相互作用研究。GAG与趋化因子的相互作用与多种生理病理过程相关,我们选...
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略符号说明
第一章 绪论
1.1 胶原蛋白及其降解物
1.1.1 胶原蛋白类型与分子结构
1.1.2 胶原蛋白降解物
1.1.3 胶原蛋白的传统鉴定方法
1.2 糖胺聚糖的种类及功能
1.2.1 肝素及硫酸乙酰肝素
1.2.2 硫酸软骨素和硫酸皮肤素
1.2.3 透明质酸
1.2.4 硫酸角质素
1.3 趋化因子的结构及生理作用
1.3.1 CCL5的结构特点
1.3.2 CCL5的生理作用
1.4 糖基化修饰的种类及功能
1.4.1 N-连接糖基化
1.4.2 O-GalNAc糖基化
1.4.3 O-GlcNAc糖基化
1.4.4 磷酸化糖基修饰
1.4.5 C-甘露糖基化
1.4.6 糖基化磷脂酰肌醇锚定
1.5 现代质谱分析技术
1.5.1 生物质谱仪
1.5.2 质谱的碎裂方式
1.6 蛋白质与糖胺聚糖的质谱分析策略
1.6.1 蛋白质的质谱分析策略
1.6.2 糖胺聚糖的质谱分析策略
1.7 糖胺聚糖与蛋白的相互作用
1.8 论文大纲
第二章 阿胶中胶原蛋白成分的鉴定
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 试剂与耗材
2.2.2 主要仪器
2.2.3 色谱柱
2.2.4 缓冲液及流动相的配制
2.3 实验方法
2.3.1 动物皮样处理
2.3.2 胶样产品处理
2.3.3 蛋白酶解
2.3.4 NanoLC-MS/MS分析
2.3.5 生物信息学分析
2.3.6 数据库搜索
2.3.7 LC-MRM-MS/MS分析
2.4 结果与讨论
2.4.1 鸟枪法蛋白组学
2.4.2 生物信息学
2.4.3 挑选每个物种的特征肽
2.4.4 特征肽的MRM定量方法研究
2.4.5 掺假阿胶产品的检测
2.4.6 掺假杂交动物皮的阿胶的鉴定
2.5 本章小结
第三章 阿胶制作中糖胺聚糖的变化
3.1 引言
3.2 试剂与耗材
3.2.1 试剂与耗材
3.2.2 主要仪器
3.2.3 色谱柱
3.2.4 缓冲液及流动相的配制
3.3 实验方法
3.3.1 糖胺聚糖的提取
3.3.2 糖胺聚糖的酶解及AMAC标记
3.3.3 LC-MRM-MS/MS分析
3.4 结果与讨论
3.4.1 糖胺聚糖的结构表征和含量测定
3.5 本章小结
第四章 人血浆中天然CCL5的鉴定
4.1 引言
4.2 药品与试剂
4.2.1 试剂与耗材
4.2.2 主要仪器
4.2.3 色谱柱
4.2.4 缓冲液及流动相的配制
4.3 实验方法
4.3.1 CCL5多抗偶联琼脂糖珠的制备
4.3.2 CCL5的纯化
4.3.3 野豌豆凝集素亲和柱的制备
4.3.4 CCL5的糖肽富集
4.3.5 蛋白酶解
4.3.6 质谱分析
4.3.7 数据库搜索
4.4 结果与讨论
4.4.1 血浆制备
4.4.2 天然CCL5的存在形式
4.4.3 CCL5的糖基化形式
4.5 本章小结
第五章 CCL5异型体混合物的定性及定量研究
5.1 引言
5.2 药品与试剂
5.2.1 试剂与耗材
5.2.2 主要仪器
5.2.3 色谱柱
5.2.4 缓冲液及流动相的配制
5.3 实验方法
5.3.1 CCL5异型体混合物的酶解
5.3.2 CCL5异型体混合物的质谱分析
5.3.3 CCL5混合物的定量方法摸索
5.3.4 数据处理
5.4 结果与讨论
5.4.1 CCL5糖基化异型体的合成
5.4.2 CCL5碎裂方式选择
5.4.3 HCD和ETD鉴定CCL5
5.4.4 CCL5定量方法应用
5.5 本章小结
第六章 CCL5与肝素相互作用研究
6.1 引言
6.2 药品与试剂
6.2.1 试剂与耗材
6.2.2 主要仪器
6.2.3 色谱柱
6.2.4 缓冲液及流动相的配制
6.3 实验方法
6.3.1 BLI测定
6.3.2 分子对接模拟
6.3.3 CCL5混合物过肝素亲和柱
6.3.4 洗脱样品的定量质谱分析
6.3.5 数据处理
6.4 结果与讨论
6.4.1 CCL5个体与肝素的相互作用
6.4.2 分子对接模拟
6.4.3 CCL5混合物与肝素的相互作用
6.5 本章小结
全文总结
附录
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文及申请的专利
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3660755
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
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中文摘要
ABSTRACT
缩略符号说明
第一章 绪论
1.1 胶原蛋白及其降解物
1.1.1 胶原蛋白类型与分子结构
1.1.2 胶原蛋白降解物
1.1.3 胶原蛋白的传统鉴定方法
1.2 糖胺聚糖的种类及功能
1.2.1 肝素及硫酸乙酰肝素
1.2.2 硫酸软骨素和硫酸皮肤素
1.2.3 透明质酸
1.2.4 硫酸角质素
1.3 趋化因子的结构及生理作用
1.3.1 CCL5的结构特点
1.3.2 CCL5的生理作用
1.4 糖基化修饰的种类及功能
1.4.1 N-连接糖基化
1.4.2 O-GalNAc糖基化
1.4.3 O-GlcNAc糖基化
1.4.4 磷酸化糖基修饰
1.4.5 C-甘露糖基化
1.4.6 糖基化磷脂酰肌醇锚定
1.5 现代质谱分析技术
1.5.1 生物质谱仪
1.5.2 质谱的碎裂方式
1.6 蛋白质与糖胺聚糖的质谱分析策略
1.6.1 蛋白质的质谱分析策略
1.6.2 糖胺聚糖的质谱分析策略
1.7 糖胺聚糖与蛋白的相互作用
1.8 论文大纲
第二章 阿胶中胶原蛋白成分的鉴定
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 试剂与耗材
2.2.2 主要仪器
2.2.3 色谱柱
2.2.4 缓冲液及流动相的配制
2.3 实验方法
2.3.1 动物皮样处理
2.3.2 胶样产品处理
2.3.3 蛋白酶解
2.3.4 NanoLC-MS/MS分析
2.3.5 生物信息学分析
2.3.6 数据库搜索
2.3.7 LC-MRM-MS/MS分析
2.4 结果与讨论
2.4.1 鸟枪法蛋白组学
2.4.2 生物信息学
2.4.3 挑选每个物种的特征肽
2.4.4 特征肽的MRM定量方法研究
2.4.5 掺假阿胶产品的检测
2.4.6 掺假杂交动物皮的阿胶的鉴定
2.5 本章小结
第三章 阿胶制作中糖胺聚糖的变化
3.1 引言
3.2 试剂与耗材
3.2.1 试剂与耗材
3.2.2 主要仪器
3.2.3 色谱柱
3.2.4 缓冲液及流动相的配制
3.3 实验方法
3.3.1 糖胺聚糖的提取
3.3.2 糖胺聚糖的酶解及AMAC标记
3.3.3 LC-MRM-MS/MS分析
3.4 结果与讨论
3.4.1 糖胺聚糖的结构表征和含量测定
3.5 本章小结
第四章 人血浆中天然CCL5的鉴定
4.1 引言
4.2 药品与试剂
4.2.1 试剂与耗材
4.2.2 主要仪器
4.2.3 色谱柱
4.2.4 缓冲液及流动相的配制
4.3 实验方法
4.3.1 CCL5多抗偶联琼脂糖珠的制备
4.3.2 CCL5的纯化
4.3.3 野豌豆凝集素亲和柱的制备
4.3.4 CCL5的糖肽富集
4.3.5 蛋白酶解
4.3.6 质谱分析
4.3.7 数据库搜索
4.4 结果与讨论
4.4.1 血浆制备
4.4.2 天然CCL5的存在形式
4.4.3 CCL5的糖基化形式
4.5 本章小结
第五章 CCL5异型体混合物的定性及定量研究
5.1 引言
5.2 药品与试剂
5.2.1 试剂与耗材
5.2.2 主要仪器
5.2.3 色谱柱
5.2.4 缓冲液及流动相的配制
5.3 实验方法
5.3.1 CCL5异型体混合物的酶解
5.3.2 CCL5异型体混合物的质谱分析
5.3.3 CCL5混合物的定量方法摸索
5.3.4 数据处理
5.4 结果与讨论
5.4.1 CCL5糖基化异型体的合成
5.4.2 CCL5碎裂方式选择
5.4.3 HCD和ETD鉴定CCL5
5.4.4 CCL5定量方法应用
5.5 本章小结
第六章 CCL5与肝素相互作用研究
6.1 引言
6.2 药品与试剂
6.2.1 试剂与耗材
6.2.2 主要仪器
6.2.3 色谱柱
6.2.4 缓冲液及流动相的配制
6.3 实验方法
6.3.1 BLI测定
6.3.2 分子对接模拟
6.3.3 CCL5混合物过肝素亲和柱
6.3.4 洗脱样品的定量质谱分析
6.3.5 数据处理
6.4 结果与讨论
6.4.1 CCL5个体与肝素的相互作用
6.4.2 分子对接模拟
6.4.3 CCL5混合物与肝素的相互作用
6.5 本章小结
全文总结
附录
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文及申请的专利
学位论文评阅及答辩情况表
本文编号：3660755
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