氟化钠对猪卵母细胞减数分裂成熟的影响及机制研究

发布时间：2022-12-04 22:40

　　氟是与人类健康密切相关的一种必需的微量元素,但长期、过量的摄入氟可以引起机体氟中毒,导致组织和器官严重受损,影响人类健康。本试验以猪卵母细胞作为NaF的毒理学模型,研究NaF对卵母细胞的核成熟、细胞质成熟以及印记基因的DNA甲基化模式的影响。主要结果如下:1、分别用0 mM、2 mM、5 mM和10 mM NaF处理卵丘卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexs,COCs）,发现5 mM和10 mM NaF处理COCs时卵丘颗粒细胞不能扩展,卵母细胞成熟率分别呈显著性和极显著性下降;后续的研究采用5 mM NaF来处理猪卵母细胞。2、对成熟卵母细胞的DNA和α微管蛋白进行免疫荧光染色,发现NaF处理组的正常纺锤体形态的卵母细胞数量与对照组相比显著减少（20.10%vs.56.27%,P＜0.05）,拖尾纺锤体的卵母细胞数量显著增加（9.53%vs.1.37%,P＜0.05）,多极纺锤体的卵母细胞数量极显著增加（37.83%vs.0.80%,P＜0.01）;用FITC标记的花生凝集素标记成熟卵母细胞的皮质颗粒,在激光共聚焦扫描显微镜下评价皮质颗粒分布,发现NaF处理组... 

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
常用中英文缩略语表
1 前言
    1.1 氟的毒性效应及对生殖系统的影响
        1.1.1 氟对雌性生殖器官的影响
        1.1.2 氟对雄性生殖器官的影响
        1.1.3 氟对雌性生殖细胞的影响
        1.1.4 氟对雄性生殖细胞的影响
        1.1.5 氟对生殖内分泌的影响
        1.1.6 氟对个体发育的影响
        1.1.7 氟的遗传毒性效应
    1.2 卵母细胞成熟和持续发育能力的影响因素
        1.2.1 卵母细胞减数分裂成熟
        1.2.2 卵母细胞核成熟
        1.2.3 卵母细胞质成熟
    1.3 卵母细胞与基因印记
        1.3.1 印记基因
        1.3.2 DNA甲基化
        1.3.3 神经元抑制素(Neuronatin,NNAT)
    1.4 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 卵母细胞
        2.1.2 菌株与载体
        2.1.3 主要实验仪器
        2.1.4 主要试验耗材和商品化试剂
        2.1.5 常用试剂的配制
    2.2 方法
        2.2.1 猪卵母细胞培养
        2.2.2 免疫荧光染色
        2.2.3 激光共聚焦评价皮质颗粒分布
        2.2.4 线粒体膜电位测定
        2.2.5 检测早期凋亡的卵母细胞
        2.2.6 卵母细胞孤雌激活和囊胚培养
        2.2.7 RNA提取及荧光定量PCR
        2.2.8 PCR扩增、克隆及测序
        2.2.9 抗体注射
        2.2.10 评估卵母细胞中的葡萄糖转运
        2.2.11 数据分析
3 结果与分析
    3.1 NaF对猪COCs卵丘扩展和卵母细胞成熟度的影响
        3.1.1 不同浓度Na F处理对猪COCs卵丘扩展的影响
        3.1.2 不同浓度Na F处理对猪卵母细胞成熟度的影响
        3.1.3 不同浓度Na F的 IVM培养基渗透压对猪卵母细胞成熟度的影响
    3.2 NaF对猪卵母细胞纺锤体形态的影响
    3.3 NaF对猪卵母细胞皮质颗粒分布的影响
    3.4 NaF对猪卵母细胞线粒体膜电位的影响
    3.5 NaF对猪卵母细胞早期凋亡的影响
    3.6 卵母细胞孤雌激活和囊胚培养
    3.7 NaF对卵母细胞印记基因表达的影响
    3.8 NaF对 NNAT甲基化的影响
    3.9 NaF对 NNAT蛋白表达水平的影响
    3.10 NaF对葡萄糖转运能力的影响
    3.11 NNAT抗体注射对葡萄糖转运的影响
4 讨论
    4.1 NaF对猪卵母细胞成熟的影响
    4.2 NaF对孤雌激活猪卵母细胞囊胚发育的影响
    4.3 NaF对猪卵母细胞印记基因mRNA水平的影响
    4.4 NaF对猪卵母细胞NNAT甲基化模式的影响
    4.5 NaF通过改变NNAT甲基化模式影响葡萄糖转运
5 小结
    5.1 本研究的主要结论
    5.2 本研究的创新之处
    5.3 本研究的不足之处
    5.4 下一步的工作计划
参考文献
在读期间发表的文章
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]DNA damage,apoptosis and cell cycle changes induced by fluoride in rat oral mucosal cells and hepatocytes[J]. Ling-Fei He Jian-Gang Chen,Department of Dental Medicine,Zhongnan Hospital,Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(07)
[3]应用小鼠胚胎体外培养技术研究氟的胚胎发育毒性[J]. 张本忠,高小玲.  兰州医学院学报. 2004(01)
[4]氟致雄性大鼠生殖功能损害的实验研究[J]. 崔留欣,姜春霞,王锡林,程学敏.  中国地方病学杂志. 2003(03)
[5]氟砷染毒对大鼠生殖发育毒性的研究[J]. 张晨,凌冰,刘继文,王国荃,肖碧玉.  卫生研究. 2000(03)
[6]不同时间氟暴露对孕鼠甲状腺形态和功能的影响[J]. 常青,戎诚兴,张世明.  微量元素与健康研究. 1998(02)
[7]氟化钠对大鼠睾丸性腺功能及形态学的影响[J]. 甄炯,陈荣安,章孟本.  卫生毒理学杂志. 1992(02)
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本文编号：3709122