非洲猪瘟病毒蛋白对cGAS-STING信号通路抑制作用研究
发布时间：2023-02-28 18:24
非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是核质巨DNA病毒,可感染家猪和欧洲野猪等,其发病率和死亡率可达100%。自2018年8月我国出现首例非洲猪瘟(African swine fever,ASF)病例,疫情目前已经蔓延至31个省份或地区,防控形势严峻。ASFV拥有庞大的基因组结构和复杂的免疫逃逸机制,使得该病仍未有商品化疫苗问世。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(Cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是近期发现的DNA胞质模式识别受体,在激活宿主天然免疫、调控适应性免疫中发挥重要作用。cGAS能够识别并结合存在于胞质中DNA,催化合成环化GMP-AMP(cyclic GMP-AMP,cGAMP),后者结合并活化干扰素刺激因子(Stimulator of interferon gene,STING),STING招募TBK1激活IRF3和NF-κB,介导Ⅰ型干扰素和促炎性因子的转录表达。cGAS-STING介导的抗病毒反应是研究热点之一,本文初步筛选具有抑制cGAS-STING信号通路功能的ASFV蛋白并探讨其作用机制,为研发安全有效的AS...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一章 引言
1.1 ASF概述
1.1.1 非洲猪瘟的流行史
1.1.2 ASF的传播特征
1.2 ASFV概述
1.3 ASFV免疫逃逸蛋白研究进展
1.3.1 病毒蛋白调控宿主细胞蛋白表达
1.3.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干扰素信号通路及NF-κB信号通路
1.3.3 病毒蛋白调控细胞凋亡
1.3.4 病毒其它免疫抑制蛋白
1.4 cGAS-STING DNA识别信号通路
1.4.1 抗病毒天然免疫
1.4.2 DNA模式受体及其重要接头蛋白
1.4.3 cGAS-STING信号通路
1.4.4 病毒逃逸cGAS-STING介导的抗病毒天然免疫
1.5 研究目的与意义
第二章 ASFV Georgia 2007株多基因家族免疫抑制基因筛选
2.1 材料
2.1.1 菌株和细胞培养相关材料
2.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
2.1.3 试剂盒
2.1.4 其他主要材料
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要试剂的配置
2.2 主要方法
2.2.1 质粒的构建
2.2.2 质粒提取
2.2.3 荧光定量PCR
2.2.4 细胞培养和传代
2.2.5 瞬时转染
2.2.6 双荧光素酶报告基因检测
2.2.7 统计分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ASFV Georgia 2007株MGF360免疫抑制基因的筛选
2.3.2 ASFV Georgia 2007株MGF505免疫抑制基因的筛选
2.3.3 ASFV Georgia 2007株MGF110免疫抑制基因的筛选
2.3.4 ASFV Georgia 2007株MGF100和MGF300免疫抑制基因的筛选
2.3.5 ASFV-G-ΔMGF缺失MGF360和MGF505免疫抑制基因的筛选
2.4 讨论
第三章 ASFV-SY18 MGF360-12L蛋白对cGAS-STING信号通路抑制作用研究
3.1 材料
3.1.1 菌株、细胞和病毒及培养相关材料
3.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
3.1.3 抗体和试剂盒
3.1.4 SDS-PAGE以及Western-blot相关试剂
3.1.5 其他主要材料
3.1.6 主要仪器
3.1.7 主要试剂的配置
3.2 主要方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 质粒提取
3.2.3 荧光定量PCR
3.2.4 细胞培养和传代
3.2.5 瞬时转染
3.2.6 Western blot分析
3.2.7 双荧光素酶报告基因检测
3.2.8 VSV-GFP病毒的扩增与滴定
3.2.9 统计分析
3.3 结果与分析
3.3.1 ASFV MGF360-12L抑制cGAS-STING介导IFN-β和NF-κB的转录激活
3.3.2 MGF360-12L抑制TBK1和IRF3-5D诱导的IFN-β表达
3.3.3 MGF360-12L抑制TBK1 mRNA水平
3.3.4 MGF360-12L抑制TBK1和IKKβ介导的NF-κB信号通路
3.3.5 MGF360-12L抑制IFN-β介导的免疫应答和抗病毒作用
3.3.6 MGF360-12L抑制IFN-β介导的ISGs表达
3.3.7 MGF360-12L免疫抑制功能区域的鉴定
3.4 讨论
第四章 ASFV-SY18 DP96R蛋白对CGAS-STING信号通路抑制作用研究
4.1 材料
4.1.1 菌株、细胞和病毒
4.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
4.1.3 主要抗体、试剂及试剂盒
4.1.4 SDS-PAGE以及Western-blot相关试剂
4.1.5 其他主要材料
4.1.6 主要仪器
4.1.7 主要试剂的配置
4.2 方法
4.2.1 质粒构建与提取
4.2.2 荧光定量PCR
4.2.3 细胞培养、传代和瞬时转染
4.2.4 病毒抑制试验
4.2.5 Western blot分析
4.2.6 双荧光素酶报告基因检测
4.2.7 统计学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 DP96R蛋白抑制cGAS/STING介导的IFN-β和NF-κB活化
4.3.2 DP96R抑制TBK1介导的IFN产生和NF-κB活化
4.3.3 DP96R抑制TBK1和IKKβ介导NF-κB激活
4.3.4 DP96R抑制TBK1磷酸化及TBK1介导的抗病毒效应
4.3.5 DP96R蛋白免疫抑制功能结构域的鉴定
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3751624
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一章 引言
1.1 ASF概述
1.1.1 非洲猪瘟的流行史
1.1.2 ASF的传播特征
1.2 ASFV概述
1.3 ASFV免疫逃逸蛋白研究进展
1.3.1 病毒蛋白调控宿主细胞蛋白表达
1.3.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干扰素信号通路及NF-κB信号通路
1.3.3 病毒蛋白调控细胞凋亡
1.3.4 病毒其它免疫抑制蛋白
1.4 cGAS-STING DNA识别信号通路
1.4.1 抗病毒天然免疫
1.4.2 DNA模式受体及其重要接头蛋白
1.4.3 cGAS-STING信号通路
1.4.4 病毒逃逸cGAS-STING介导的抗病毒天然免疫
1.5 研究目的与意义
第二章 ASFV Georgia 2007株多基因家族免疫抑制基因筛选
2.1 材料
2.1.1 菌株和细胞培养相关材料
2.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
2.1.3 试剂盒
2.1.4 其他主要材料
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要试剂的配置
2.2 主要方法
2.2.1 质粒的构建
2.2.2 质粒提取
2.2.3 荧光定量PCR
2.2.4 细胞培养和传代
2.2.5 瞬时转染
2.2.6 双荧光素酶报告基因检测
2.2.7 统计分析
2.3 结果与分析
2.3.1 ASFV Georgia 2007株MGF360免疫抑制基因的筛选
2.3.2 ASFV Georgia 2007株MGF505免疫抑制基因的筛选
2.3.3 ASFV Georgia 2007株MGF110免疫抑制基因的筛选
2.3.4 ASFV Georgia 2007株MGF100和MGF300免疫抑制基因的筛选
2.3.5 ASFV-G-ΔMGF缺失MGF360和MGF505免疫抑制基因的筛选
2.4 讨论
第三章 ASFV-SY18 MGF360-12L蛋白对cGAS-STING信号通路抑制作用研究
3.1 材料
3.1.1 菌株、细胞和病毒及培养相关材料
3.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
3.1.3 抗体和试剂盒
3.1.4 SDS-PAGE以及Western-blot相关试剂
3.1.5 其他主要材料
3.1.6 主要仪器
3.1.7 主要试剂的配置
3.2 主要方法
3.2.1 质粒的构建
3.2.2 质粒提取
3.2.3 荧光定量PCR
3.2.4 细胞培养和传代
3.2.5 瞬时转染
3.2.6 Western blot分析
3.2.7 双荧光素酶报告基因检测
3.2.8 VSV-GFP病毒的扩增与滴定
3.2.9 统计分析
3.3 结果与分析
3.3.1 ASFV MGF360-12L抑制cGAS-STING介导IFN-β和NF-κB的转录激活
3.3.2 MGF360-12L抑制TBK1和IRF3-5D诱导的IFN-β表达
3.3.3 MGF360-12L抑制TBK1 mRNA水平
3.3.4 MGF360-12L抑制TBK1和IKKβ介导的NF-κB信号通路
3.3.5 MGF360-12L抑制IFN-β介导的免疫应答和抗病毒作用
3.3.6 MGF360-12L抑制IFN-β介导的ISGs表达
3.3.7 MGF360-12L免疫抑制功能区域的鉴定
3.4 讨论
第四章 ASFV-SY18 DP96R蛋白对CGAS-STING信号通路抑制作用研究
4.1 材料
4.1.1 菌株、细胞和病毒
4.1.2 质粒以及质粒构建相关材料
4.1.3 主要抗体、试剂及试剂盒
4.1.4 SDS-PAGE以及Western-blot相关试剂
4.1.5 其他主要材料
4.1.6 主要仪器
4.1.7 主要试剂的配置
4.2 方法
4.2.1 质粒构建与提取
4.2.2 荧光定量PCR
4.2.3 细胞培养、传代和瞬时转染
4.2.4 病毒抑制试验
4.2.5 Western blot分析
4.2.6 双荧光素酶报告基因检测
4.2.7 统计学分析
4.3 结果与分析
4.3.1 DP96R蛋白抑制cGAS/STING介导的IFN-β和NF-κB活化
4.3.2 DP96R抑制TBK1介导的IFN产生和NF-κB活化
4.3.3 DP96R抑制TBK1和IKKβ介导NF-κB激活
4.3.4 DP96R抑制TBK1磷酸化及TBK1介导的抗病毒效应
4.3.5 DP96R蛋白免疫抑制功能结构域的鉴定
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3751624
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