Wip -/- 小鼠附睾的iTRAQ定量蛋白质组学分析揭示雄性生殖的潜在分子机制

发布时间：2024-02-27 10:25

　　蛋白质组学和后基因组学技术在繁殖生物学和生殖学研究中的应用日益增多。精子发生和成熟对雄性生殖至关重要。野生型p53诱导的磷酸酶1(WIP1)缺失的小鼠在繁殖器官表现出缺陷。本研究旨在了解WIP1缺失影响精子发生或成熟的潜在分子机制。组织表达谱显示WIP1在雄性野生型小鼠的生殖器官睾丸和附睾组织中高表达。我们采用Wip1-/-小鼠为研究模型,该小鼠表现出附睾组织萎缩和明显的精子减少。我们对附睾(包含体组织及其中的精子)进行了无凝胶iTRAQ LC-MS/MS定量蛋白质组学分析。结果鉴定了总共8763种蛋白质,其中在Wip1缺失的小鼠和野生型小鼠之间鉴定出了 91种显著差异表达蛋白质(DEPs)。通过Western Blotting四种与生殖相关的差异表达蛋白(PRM2,ODF1,PIWIL1和KLHL10)得到了验证。生物学过程分析表明,Smac/Diablo介导的细胞凋亡途径和SERPINA3介导的炎症过程可能是导致附睾萎缩和精子数量明显减少的潜在分子途径。与生殖相关的差异表达蛋白的网络分析揭示了可能的影响精子成熟的与WIP1互作的途径,例如WIP1缺失可能通过p53降低ODF1和PR...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩略词表(Abbreviations)
第一章 前言
    1.1 雄性不育与精子发生和精子成熟
    1.2 WIP1及其在雄性生殖中的作用
    1.3 蛋白质组学在附睾研究中的应用
    1.4 研究目的和意义
第二章 材料和方法
    2.1 附睾样本
    2.2 蛋白质样品制备和定量蛋白质组学分析
    2.3 蛋白质数据库检索和蛋白质定量
    2.4 Western Blotting、苏木-精伊红染色、免疫荧光染色及免疫组织化学染色
第三章 结果
    3.1 WIP1在附睾中的表达及其缺失对附睾的影响
    3.2 Wip1^-/-小鼠附睾和野生型小鼠附睾的差异表达蛋白
    3.3 差异表达蛋白的验证
    3.4 差异表达蛋白的富集分析及与生殖的相关性分析
    3.5 蛋白质相互作用网络分析
    3.6 在睾丸中验证与精子发生相关的DEPs: PRM2和PIWIL1
第四章 讨论
第五章 结论
致谢
参考文献
附表
作者简介



本文编号：3912552