TOLL样受体4/核转录因子-κB信号通路在脂多糖诱导奶牛乳腺炎症反应中的作用

发布时间：2024-04-09 05:55

　　奶牛乳房炎通常就是指乳腺发生了炎症,是由多种因素引起严重程度不同的复杂疾病。最后会由于环境、病原体以及宿主的不同而导致不同的后果,因此治疗代价较高且不容易治愈。当致病菌进入到无菌环境,常常会破坏一些物理屏障如乳头而引起乳房炎,这就需要及时和适当的宿主防御来防止细菌的滋生避免炎症的加剧。另一方面,这些传染性病原体如金黄色葡萄球菌和链球菌很容易从感染牛的一个乳区蔓延到其它乳区或者是其它的牛。像年龄、泌乳阶段和体细胞评分这些因素都会影响牛感染乳房炎的几率。不同的病原体会引起不同的乳房炎从而导致乳腺组织产生不同的免疫反应,因此宿主需要根据病原体的情况来产生相应的应答从而保护机体免受感染。本试验以中国荷斯坦奶牛的乳腺组织和乳腺上皮细胞为研究对象,研究了炎症信号通路的作用机制。通过组织学观察正常和乳房炎乳腺组织的结构差异,采用基因芯片的方法分析了 TLR4/NF-κB炎症信号通路在正常与乳房炎乳腺组织中的基因表达情况;利用体外培养的方法,研究了化学抑制和siRNA抑制NF-κB基因对乳腺上皮细胞中TLR4/NF-κB信号通路关键基因表达的影响;运用蛋白质组iTRAQ技术,筛选激活和抑制p65条件下...

【文章页数】：142 页

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词(Abbreviation)
第一部分 文献综述
    第一章 乳房炎的研究进展
        1 乳房炎综述
            1.1 抗生素
            1.2 噬菌体
            1.3 接种疫苗
            1.4 纳米粒子
            1.5 细胞因子
            1.6 天然化合物
    第二章 LPS/TLR4信号转导通路
        1 Toll样蛋白概述
            1.1 Toll样蛋白的发现
            1.2 Toll样蛋白的生物学功能
        2 TLR转导信号
            2.1 MyD88-依赖途径
            2.2 MyD88非依赖途径
            2.3 TLR4信号通路的负向调控
            2.4 NF-κB信号通路
    第三章 蛋白质组学融合下一代基因测序
        1 综述
        2 蛋白质-基因组学:比蛋白质组学和基因组学更准确
        3 蛋白质基因组学遇到的挑战以及机遇
        4 对蛋白质基因组学定量的综合见解
        5 不同分子层的交互作用
        6 未来的前景
        7 本研究的目的及意义
第二部分 试验研究
    第四章 荷斯坦奶牛正常与乳房炎乳腺组织的基因表达谱芯片分析
        1 材料与方法
            1.1 试验动物及样品采集
            1.2 RNA提取
            1.3 基因芯片分析
            1.4 RT-qPCR
            1.5 Western Blot
            1.6 数据统计
        2 试验结果
            2.1 奶牛乳腺组织病理学检查结果
            2.2 基因芯片数据的预处理
            2.3 差异表达的基因
            2.4 差异基因的GO与KEGG分析
            2.5 芯片结果验证
            2.6 免疫印迹验证芯片结果
        3 讨论
        4 小结
    第五章 化学干涉抑制NF-KB基因对TLR4/ NF-KB信号通路表达的影响
        1 材料与方法
            1.1 样品采集
            1.2 试剂
            1.3 仪器
            1.4 试验方法
            1.5 统计方法
        2 结果与分析
            2.1 奶牛乳腺上皮形态学观察
            2.2 Bay11-7082对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响
            2.3 Bay11-7082对炎症反应模型奶牛上皮细胞活力的影响
            2.4 Bay11-7082对炎症反应模型奶牛上皮细胞凋亡的影响
            2.5 Bay11-7082对LPS诱导的乳腺上皮细胞TLR4,NF-κB蛋白表达的影响
            2.6 Bay11-7082对LPS诱导的乳腺上皮细胞IL-1β和TNF-α释放的影响
            2.7 共聚焦显微镜观察Bay11-7082对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB表达的影响
            2.8 NF-κB基因对TLR4/NF-κB信号通路基因表达水平的影响
        3 讨论
        4 小结
    第六章 基因干涉NF-κB基因对TLR4/ NF-κB信号通路表达的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 试剂
            1.3 仪器
            1.4 试验方法
            1.5 数据处理与分析
        2 结果
            2.1 NF-κB-siRNA干扰引物筛选与优化
            2.2 NF-κB-siRNA对LPS诱导的乳腺上皮细胞TLR4、NF-κB蛋白表达的影响
            2.3 NF-κB-siRNA对LPS诱导的乳腺上皮细胞IL-1β和TNF-α释放的影响
            2.4 共聚焦显微镜观察NF-κB-siRNA对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞NF-κB表达的影响
            2.5 NF-κB-siRNA基因对TLR4/NF-κB信号通路基因表达水平的影响
        3 讨论
        4 小结
    第七章 激活和抑制p65条件下乳腺上皮细胞差异蛋白质的筛选
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 试剂
            1.3 仪器
            1.4 试验方法
            1.5 数据处理与分析
        2 结果与分析
            2.1 鉴定结果统计
            2.2 定量蛋白质组学的概述
            2.3 差异表达的蛋白
            2.4 蛋白质功能注释
        3 讨论
        4 小结
参考文献
全文结论
创新点
附录
攻读博士期间发表及待发表的论文
致谢



本文编号：3949418