口腔扁平苔藓表面菌群分析及其促上皮细胞炎症性免疫应答的研究

发布时间：2023-03-23 00:27

　　目的:检测口腔扁平苔藓(OLP)患者颊黏膜表面菌群变化,研究具核梭杆菌对角质形成细胞TLR4/NF-κB通路的影响。方法:(1)收集健康对照与OLP患者颊黏膜样本,高通量技术检测细菌16S rRNA基因,筛选出对照组与OLP组之间颊黏膜表面差异最明显的菌属。(2)real-time PCR技术验证16S测序结果。其次,收集OLP患者损害与非损害黏膜样本,检测16S测序筛选出的细菌表达水平。最后,收集OLP患者与对照颊黏膜组织,检测组织内细菌表达。原位杂交技术检测OLP患者颊黏膜内细菌存在。(3)体外培养人正常口腔角质形成细胞,并使用具核梭杆菌(ATCC25586)感染细胞。在感染后不同时间点检测细胞增殖、IL-1β、IL-6与TNF-α表达,以及细胞TLR4/NF-κB表达。结果:(1)16S测序发现:(1)属水平,与对照组比较,梭杆菌、颗粒链球、消化链球菌与小单胞菌属在OLP组丰度增加。(2)线性判别分析发现:对组间差异影响最大的菌属是梭杆菌与颗粒链菌。(2)real-time PCR发现,与非损害区域比较,具核梭杆菌在OLP黏膜损害表面表达升高(P=0.001﹤0.01)。在白纹型...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 口腔扁平苔藓损害表面菌群改变及其与临床类型的关系
    材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
    结果
        2.1 优质序列(quality control reads,Q-C 序列)长度分析
        2.2 稀释曲线
        2.3 α多样性分析
        2.4 健康对照组与OLP组菌群结构分析
        2.5 线性判别分析健康对照组与OLP患者组之间差异菌属
        2.6 PICRUSt 菌群基因功能预测
    讨论
    小结
第二部分 口腔扁平苔藓损害表面具核梭杆菌的鉴定及其与损害的相关性
    材料与方法
        1.1 材料
        1.2 实验方法
    结果
        2.1 real-time PCR技术验证本研究第一部分16SrRNA 基因测序结果
        2.2 25 例 OLP 患者损害与非损害黏膜表面细菌与具核梭杆菌表达水平的自身对照研究
        2.3 回顾性分析 20 例 OLP 患者与 10 例健康对照黏膜组织内细菌与具核梭杆菌的表达水平
        2.4 原位杂交技术检测 OLP 患者颊黏膜组织内细菌存在
    讨论
    小结
第三部分 具核梭杆菌对人正常口腔角质形成细胞TLR4/NF-κB通路及其相关细胞因子表达的影响
    材料与方法
        1.1 材料
        1.2 角质形成细胞与具核梭杆菌
        1.3 BHI肉汤与主要试剂的配制
        1.4 方法
    结果
        2.1 具核梭杆菌的培养与鉴定
        2.2 角质形成细胞的鉴定
        2.3 具核梭杆菌促进了角质形成细胞的增殖
        2.4 具核梭杆菌对角质形成细胞分泌促炎因子的影响
        2.5 具核梭杆菌增强了角质形成细胞 TLR4 蛋白与磷酸化 NF-κB p65 蛋白表达
        2.6 具核梭杆菌促进了角质形成细胞TLR4 基因的表达
        2.7 口腔扁平苔藓患者颊黏膜组织关键转录因子的分析
    讨论
    小结
全文总结
创新之处
参考文献
致谢
在读期间发表的论文或主持课题



本文编号：3767899