杨梅和桃UDP-鼠李糖合成酶基因克隆及生化功能研究

发布时间：2023-11-24 23:09

　　UDP-鼠李糖是植物糖苷类衍生物的重要糖供体,参与各种鼠李糖苷的形成。鼠李糖苷广泛存在于植物不同组织部位,具有重要生物活性。然而,商品化的UDP-鼠李糖难以获得,限制了植物鼠李糖苷相关的生物学研究。本论文以杨梅(Morella rubra)和桃(Prunus persica)为研究材料,鉴定不同组织中黄酮醇鼠李糖苷的种类,克隆UDP-鼠李糖合成酶基因,并对其生化功能进行研究。主要结果如下:1、利用HPLC,在杨梅不同组织中检测到三种黄酮醇鼠李糖苷,即杨梅素-3-O-鼠李糖苷(M3Rha)、槲皮素-3-O-鼠李糖苷(Q3Rha)和山奈酚-3-O-鼠李糖苷(K3Rha);在桃不同组织中检测到四种黄酮醇鼠李糖苷,即槲皮素-3-O-鼠李糖基-葡萄糖苷(芸香糖苷)(Q3Rut)、山奈酚-3-O-芸香糖苷(K3Rut)、异鼠李素-3-O-芸香糖苷(I3Rut)和K3Rha。2、从杨梅中克隆了两个UDP-鼠李糖合成酶基因,命名为MrRHM1和MrNRS/ER,编码区长度分别为2016 bp和909 bp。MrNRS/ER氨基酸序列与MrRHM1的C端序列高度相似。重组蛋白体外催化反应表明,MrRHM...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
Abstract
缩略语表 Abbreviations
1 文献综述
    1.1 概述
    1.2 UDP-鼠李糖的功能及合成途径
        1.2.1 UDP-鼠李糖的功能
        1.2.2 UDP-鼠李糖的合成途径
    1.3 植物UDP-鼠李糖合成酶研究进展
        1.3.1 RHM基因的鉴别、分离及生化特性研究
        1.3.2 NRS/ER基因的鉴别、分离及生化特性研究
        1.3.3 UDP-鼠李糖合成酶生物学功能研究
    1.4 黄酮醇鼠李糖苷研究进展
    1.5 研究目标与内容
        1.5.1 研究目标
        1.5.2 研究内容
2 试验材料及方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株与质粒
        2.1.3 酶及试剂盒
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 试剂配制
        2.1.6 主要仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 植物组织黄酮醇糖苷提取及检测
        2.2.2 序列生物信息学分析
        2.2.3 植物组织RNA提取
        2.2.4 逆转录合成cDNA
        2.2.5 基因克隆及载体构建
        2.2.6 重组质粒鉴定
        2.2.7 原核表达及蛋白纯化
        2.2.8 SDS-PAGE凝胶电泳
        2.2.9 重组蛋白催化反应及产物检测
        2.2.10 重组蛋白酶学性质分析
3 杨梅UDP-鼠李糖合成酶基因克隆及生化功能研究
    3.1 试验结果
        3.1.1 HPLC检测黄酮醇鼠李糖苷结果
        3.1.2 MrRHM1和MrNRS/ER基因克隆
        3.1.3 MrRHM1和MrNRS/ER的生物信息学分析结果
        3.1.4 MrRHM1和MrNRS/ER重组蛋白检测结果
        3.1.5 MrRHM1重组蛋白催化分析结果
        3.1.6 MrNRS/ER重组蛋白催化分析结果
        3.1.7 重组蛋白催化产物确定
        3.1.8 MrRHM1重组蛋白酶学性质分析结果
    3.2 讨论
4 桃UDP-鼠李糖合成酶基因克隆及生化功能研究
    4.1 试验结果
        4.1.1 HPLC检测黄酮醇鼠李糖苷结果
        4.1.2 PpRHM1和PpRHM2 基因克隆
        4.1.3 PpRHM1和PpRHM2 的生物信息学分析结果
        4.1.4 PpRHM1和PpRHM2 重组蛋白检测结果
        4.1.5 PpRHM1和PpRHM2 重组蛋白催化分析结果
        4.1.6 PpRHM1和PpRHM2 重组蛋白酶学性质分析结果
    4.2 讨论
5 小结与展望
    5.1 小结
    5.2 展望
参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果



本文编号：3866782