闹羊花ISSR-PCR反应体系建立及优化

发布时间：2021-12-24 07:48

　　以闹羊花的叶片为试材,采用正交实验和单因素试验2种方法对闹羊花ISSR-PCR反应体系的主要影响因子(Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、引物、Mg²⁺以及反应程序)进行了优化组合。以期为深入开展闹羊花种质资源遗传多样性的研究提供参考依据。结果表明:闹羊花ISSR-PCR反应体系中各组分的Taq DNA聚合酶用量为2.5 U,引物浓度为0.2μmol·L^-1,Mg²⁺浓度为1.0 mmol·L^-1,dNTPs浓度为0.4 mmol·L^-1,模板DNA浓度为60 ng,10×Buffer为2μL,以纯水补足反应总体积至20μL。扩增程序为94℃条件下预变性5 min;94℃条件下变性30 s,49.6℃条件下退火30 s,72℃条件下延伸30 s,以上3个步骤循环45次,最后72℃延伸5 min。 

【文章来源】：北方园艺. 2020,(21)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

闹羊花叶片DNA电泳图

ISSR-PCR正交实验

不同引物浓度对于ISSR-PCR扩增结果的影响

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3550097