共培养体系下小鼠巨噬细胞RAW264.7与骨骼肌细胞C2C12间的相互作用

发布时间：2021-04-16 18:13

　　目的建立巨噬细胞RAW264.7和成肌细胞C2C12共培养体系,检测该共培养体系下培养不同时长RAW264.7和C2C12间的相互作用。方法 Transwell小室内以成肌分化培养基共培养RAW264. 7和C2C12,相差显微镜观察细胞形态,共培养1、3、5 d后,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测Myf5、MyoD、myogenin、iNOS和Arg-1蛋白水平,ELISA法检测培养细胞上清液IL-1β和IL-10分泌量。结果①共培养对C2C12的影响:加快成肌分化进程、促进多核肌管形成,与同时间点对照组相比,共培养1 d即抑制Myf5蛋白表达（P<0.05）,增加MyoD（P<0.05）和myogenin（P<0.01）蛋白表达;共培养3 d抑制Myf5蛋白表达（P<0.01）,增加MyoD蛋白表达（P<0.01）;共培养5 d降低细胞活性（P<0.05）并降低Myf5蛋白表达（P<0.01）,增加肌管面积（P<0.01）。②共培养对RAW264.7的影响:共培养对细胞形态无明显影响,与同时间点对照组相比,... 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2019,41(20)北大核心CSCD

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【部分图文】：

倒置相差显微镜观察与ＲAW264．7细胞共培养不同时长对C2C12细胞形态的影响100滋m100滋m100滋m100滋m共

100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋mDay01Day5Day对照组Day3共培养组图5倒置相差显微镜观察与C2C12细胞共培养不同时长对ＲAW264．7细胞形态的影响2．4共培养不同时长对ＲAW264．7形态的影响在倒置相差显微镜下观察与C2C12共培养对ＲAW264．7形态的影响(图5)。对照组细胞大小一致，呈圆形，可见少量伪足，随培养时间延长，细胞增殖明显，培养至第5天出现细胞簇集现象。共培养组细胞在形态上相较于同时间点对照组未见明显差异，但培养至第5天时，细胞簇集现象较同时间点对照组更加明显。以上结果从形态学上显示，与C2C12细胞共培养时对ＲAW264．7形态无明显影响，共培养后期进一步促进ＲAW264．7细胞增殖。2．5共培养不同时长对ＲAW264．7细胞增殖的影响CCK-8法检测结果显示，与同时间点对照组相比，共培养5天明显促进ＲAW264．7细胞增殖(P＜0．05，图6)。结合2．4中形态学结果，进一步说明与C2C12细胞共培养明显促进ＲAW264．7细胞增殖，且存在时间依赖性。150100500对照组共培养组RAW264.7细胞增殖率/%时间（t/d）Day3Day1Day5aa:P＜0．05，与对照组比较图6CCK-8法检测与C2C12细胞共培养不同时长对ＲAW264．7细胞增殖的影响2．6共培养不同时长对ＲAW264．7极化标志蛋白iNOS和Arg-1的影响Westernblot检测结果显示，与同时间点对照组相比，共培养1、3、5d均显著抑制M1型巨噬细胞标志蛋白iNOS表达(P＜0．01)，共培养1、3d均显著增加M2型巨噬细胞标志蛋白Arg-1表达(P＜0．01)(图7

【参考文献】：
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本文编号：3141924