siRNA下调RYR1表达对小鼠成肌细胞中线粒体的影响

发布时间：2021-04-28 21:39

　　目的:探讨雷诺丁受体1（RYR1）表达下调对小鼠成肌细胞C2C12中线粒体的影响及其发生机制。方法:采用小干扰RNA（siRNA）敲减C2C12细胞的RYR1表达,应用透射电镜对线粒体进行体视学分析,观察细胞内线粒体数目和形态学的改变,应用real-time PCR和Western blot方法检测线粒体融合蛋白2（Mfn2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的mRNA及蛋白水平的改变。结果:RYR1敲减（KD）组RYR1的mRNA水平显著降低（P<0.01）。阴性对照（NC）组及空白对照（BC）组线粒体维持长管状结构,而KD组线粒体呈碎片化改变。与NC组相比,KD组的线粒体数目呈增加趋势（差异无统计学显著性）,线粒体面积和周长显著减少（P<0.05）。KD组的Mfn2在mRNA和蛋白水平均显著降低（P<0.01）,而PGC-1α在mRNA水平显著降低（P<0.01）,在蛋白水平未见明显差异;ERK1/2在mRNA水平和蛋白水平的差异均无统计学显著性,也未检测到磷酸化ERK1/2的水平变化。结论... 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2019,35(12)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材 料 和 方 法
    1 主要实验材料、仪器和试剂
    2 方法
        2.1 siRNA设计合成
        2.2 实验分组
        2.3 C2C12细胞的培养方法
        2.4 siRNA转染
        2.5 C2C12细胞的电镜标本制备和图片摄取
        2.6 线粒体体视学分析
        2.7 Real-time PCR检测C2C12细胞内RYR1、PGC-1α、Mfn2、ERK1/2和GAPDH的mRNA表达
        2.8 Western blot法检测PGC-1α、Mfn2、ERK1/2、p-ERK1/2和GAPDH的蛋白水平
    3 统计学处理
结 果
    1 siRNA转染后RYR1 mRNA表达的改变
    2 C2C12细胞内线粒体超微结构的变化
    3 PGC-1α、Mfn2和ERK1/2的mRNA表达水平的变化
    4 PGC-1α、Mfn2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平的变化
讨 论



本文编号：3166219